Станислав Матвеев: рекордсмен России по запоминанию чисел
В 2011 году студент из Чувашии установил рекорд России по запоминанию чисел
Станислав Матвеев воспроизвел на память 8332 знака после запятой в числе Пи.
Цифры он писал на доске в течение четырех часов в присутствии комиссии и при непрерывной съемке на видеокамеру.
Молодой человек из Чебоксар учится сейчас в Московском институте электронной техники. Представители этого вуза и стали членами жюри. Потом рекорд был официально зарегистрирован в Книге рекордов России.
— Пару лет назад я увлекся упражнениями на память, техниками запоминания, — рассказал корреспонденту «РГ» Станислав. — Число Пи нельзя выучить, там нет закономерности. Его можно только запомнить. Но как это сделать, если в числе более триллиона знаков? Решил использовать образы. У каждой цифры он свой. Например, 0 — бублик, 8 — снеговик. Но проще придумать образы для трехзначных чисел: 100 — стол, 200 — динамик.
На подготовку рекорда у Станислава ушло три месяца. Запомнил все за десять дней. Ежедневно по три часа повторял, записывал на листочке. Как утверждает сам молодой человек, для него было важно не рекорд установить, а показать возможности человеческой памяти. Ведь техники запоминания очень помогают в учебе — можно быстрее запомнить исторические даты, правила русского языка, математические таблицы. Впрочем, сфера применения методик обширна: юриспруденция, бухгалтерия и так далее. Поэтому после окончания института он планирует продолжить изучение техник запоминания, заниматься тренингами и даже открыл для этого свой сайт.
По мнению Матвеева, очень небольшому проценту людей феноменальная память дана от природы. Как правило, это результат упорного труда и тренировок.
Книга
Эта книга придет на помощь всем, кто устал записывать важную информацию, а потом забывать, зачем или куда ее записал; а также всем тем, кто хочет эффективнее использовать возможности своей памяти.
Станислав Матвеев. Крах США. А нам то-какая польза?
Станислав Матвеев
Матвеев Станислав Олегович — Родился 24 августа 1955 года в г. Саки Крымской области. В 1978 году окончил Белорусский политехнический институт (инженер-строитель). В 1972-1973гг. – слесарь-комплектовщик Дубровского районного отделения «Сельхозтехника», пгт Дубровка Брянской области. В 1978–1980гг. – инженер-гидротехник проектно-сметной группы Сакского управления оросительной системы. В 1980-1982гг. – служба в Советской Армии: лейтенант, старший лейтенант в/ч 44605. В 1982–1988гг. – старший инженер, ведущий инженер, инженер первой категории отдела капитального строительства Сакского управления оросительных систем.
Крах США. А нам то-какая польза?
Нет, это не плод досужего воображения: реалии жизни таковы, что в мире правит бал экономический кризис. А, как известно, политика – это концентрированная экономика; исходя из этого, кризис имеется и в политике.
Интересны события, развернувшиеся вокруг Гренландии, где чисто экономические интересы продиктовали политическое решение о расширении прав автономии этой датской провинции, вплоть до объявления независимости – и так во всем мире!
Зашевелились Уэльс и Шотландия в Великобритании, Баскония уже не один десяток лет портит нервы испанским властям, во Франции и Италии появились трения между промышленными и аграрными районами – и все это после узаконенного Косово и признания суверенитета
Огромные противоречия возникли и в США. И вероятность развала этого государства очень велика, намного больше, чем можно даже предположить. Сегодня в США просматриваются как минимум три региона, на которые может разделиться государство, — и это без влияния извне. Это, во-первых, так называемый Блекленд – территория этнических чернокожих. Есть и политические силы, вынашивающие эту идею, есть и экономическая составляющая для ее подпитки.
Политкорректные законы США позволили афроамериканцам считать себя равноправными членами общества, не только иметь приоритетное право на работу, но и подвергать белое население уголовной ответственности за использование слов «негр» или «черный». Надо учесть и госпособия афроамериканцам, породившие целый социальный слой, поколениями не работающий и при этом сытно и весело проводящий время. А вдруг кризис, кушать захочется – а государство не дает! Что тут будет!!! Не только вой и колдовские проклятия, но и кровь – и, в первую очередь, белых…
Во-вторых, противоречия между испаноязычными гражданами и «гринго» на юге: там ситуация намного сложнее. Латинос, или чиканос, давно осели в южных штатах и прекрасно помнят, что эти территории незаконно были отторгнуты от Мексики. Там их много, есть граждане, а есть и нелегалы, стремящиеся стать гражданами — и политкорректные законы США им это позволяют. Но этим людям интересы Америки безразличны, у них свои проблемы, и основная – приличное существование, не хуже, чем у белых соседей.
Если это все умножить на амбиции и недобрую память мексиканских правителей, мечтающих нанести ответный удар за поражение в мексикано-американской войне, на желание местной элиты присосаться к нефтяным недрам и прибавить «любовь» Чавеса, Кастро и Ортеги, то все может быть возможным.
Отдельно нужно вспомнить Техас, много лет проживший самостоятельно и при этом располагающий безмерными энергоресурсами. Вот там-то и есть главное гнездо местныхсамостийников.
Не надо забывать и последствия гражданской войны в США: до сих пор во многих южных штатах очень скептически относятся к северянам. Несмотря на полтора столетия, прошедшие со времен этой трагедии, сепаратизм растет и крепнет.
В США — непростая религиозная обстановка: противоречия между католиками и протестантами не самые главные, есть противоречия и более серьезные: между исламом и всеми остальными, между последователями Конфуция или Лао Цзы и религией правящей элиты. Есть и вообще религиозная бомба – это штат Юта, где и власть, и религия в руках мормонов – главных оппонентов Вашингтона.
Юго -Запад всегда конфликтовал с Северо-Востоком, а сейчас о своих правах заявили Аляска, Пуэрто- Рико, Гавайи.
И везде есть свои экономические интересы, свои национально-религиозные особенности, свои местные элиты со своими потребностями, свои лидеры и идеологи. Вспомним о параде суверенитетов при развале СССР: как второсортные политики, деятели искусств, не котировавшиеся во всей стране, но имевшие влияние в регионах, выкраивали из большой союзной мантии свои маленькие-незалежные, и не всегда это проходило гладко и мирно.
Но это был советский народ, отлично отпрессованный КГБ и практически лишенный оружия — а что может статься в США? Аж страшно становится… А если в дело вступят вооруженные формирования Национальной Гвардии или созданные в 50-х годах как партизанский ответ на возможную оккупацию США Советским Союзом формированияминитменов? Это вообще закрытая каста, неподконтрольная ни федеральным, ни местным властям! А у них не только железная дисциплина, специалисты и прекрасное вооружение, но и свои амбиции, свои лидеры, свои интересы.
Отдельная составляющая сепаратизма – это большие города и особенно Нью-Йорк, где своя элита, с особым отношением ко всей мировой периферии.
И самое главное, президентом США избран НЕ БЕЛЫЙ, а это уже шок для определенной части населения и особенно в условиях кризиса, с которым очень тяжело бороться. Тут могут быть и поражения, и неудачи, и все это будет учтено и преломлено через призмусепаратизма.
Ну , что, испугались, уважаемые читатели? Подождите, еще не то будет! Бог с ними, с США, многим их развал доставит определенное удовольствие. Тут нужно подумать о нас. Нам это нужно? И если подойти к этому незаангажированно, то получается, что радоваться нечему.
Надо понять, что в случае падения США их ядерный потенциал останется бесконтрольным, а это угроза всему миру. Падет потребление энергоресурсов, а значит, и цены на них. Сократится потребление иных продуктов, а это усугубит мировой кризис. Не станет чисто американских товаров, а значит, дефицит подстегнет цены. И если рухнет, а он рухнет обязательно, доллар, то его разложение отравит всю мировую экономику, а сами Штаты уйдут от оплаты своих многотриллионных обязательств, блага за которые уже взяты со всего населения планеты, а расплата произошла бумажками!
После мирового хамства, продемонстрированного США, найдется много желающих показать им не только кузькину мать, но и кое-что покруче.
Просто удивительно, что до сих пор на территории штатов нет терактов. Ведь логика жизни подсказывает, что и афганцы, и иракцы, и жители Гренады, Вьетнама и Сербии не могут простить наглость, жестокость и подлость американских держиморд, из-за которых может пострадать простой гражданин.
Я уже говорил, что при падении США резко возрастет удельный вес исламского мира, а это для Европы и в том числе для нас не совсем комфортно. Франция уже ощутила это влияние, мы видим последствия войны в Чечне, встречаемся с радикалами и на нашей земле. Ислам, с более традиционными и моральными нормами жизни, вступил в конфликт с современной цивилизацией, основанной на беспринципности и разврате и поклонении новому божеству – Доллару! Христианство, и особенно католическое и протестантское, тоже стали политкорректными, а, значит, беззубыми, а в отдельных случаях и излишне терпимыми к аморальным фактам. А это значит, что мы можем остаться без объединяющей силы, без духовной поддержки и примера для подражания.
С другой стороны, резко возрастет потенциал Китая. Хоть у них и свои сепаратистские проблемы с Тибетом и уйгурами, но там жесткий режим, вымуштрованное население и сильнейшая государственная идея. Представьте, что миллионов пятьдесят молодых безоружных китайцев подойдут к границе России или Казахстана и начнут просить политического убежища — мол, тираны заедают, житья не дают! А тираны будут следить за всем этим и отдавать приказы. Да, страшновато!
Пока еще США является огромной сдерживающей силой в мире, и в случае их распада кто повлияет на стабильность в отношениях Индии и Пакистана? Россия еще не вышла из клинча девяностых годов, Европа постарела и ожирела, да еще и не переварила вновь принятых дикарей. Про Украину и говорить не стоит! Так что приятного мало. Кто квалифицированно будет противодействовать мировому терроризму? В общем, вопросов больше, чем ответов…
Естественно желание укротить амбиции США, заставить их продумывать свои поступки и давать отчет своим действиям, считаться с мнением иных стран.
Вполне реально превратить доллар из «божества» просто в валюту, даже первую среди равных, но не единственную. Однако кризис – он и в Америке, и в Африке кризис! И будем молить Бога, чтобы кризис прошел без трагических последствий и чтобы американские правители больше занимались внутренними проблемами, а не совались в дела чужих стран, в том числе и в наши…
Дата: 06.12.2008
Матвеев Станислав | literator
Матвеев Станислав Олегович, Симферополь
Матвеев Станислав Олегович, родился 24 августа 1955 года в г. Саки Крымской области. Имеет высшее образование, в 1978 году окончил Белорусский политехнический институт, инженер путей сообщения, по специальности «Автомобильные дороги».
С ноября 1972 года по август 1973 года – слесарь-комплектовщик Дубровского РО «Сельхозтехника». С августа 1973 года по сентябрь 1978 года – студент Белорусского политехнического института. С сентября 1978 года по ноябрь 1980 года – инженер-гидротехник, старший инженер проектно-сметной группы Сакского управления оросительных систем.
С ноября 1980 года по ноябрь 1982 год – служба в Советской Армии. С ноября 1982 года по сентябрь 1988 года – старший инженер, ведущий инженер, начальник проектно-сметной группы Сакского управления оросительных систем. С сентября 1988 года по май 1991 года – ведущий инженер, инженер I категории отдела капитального строительства Сакского РАПО. С марта 1991 года по август 1994 года – директор МП «Зодчий». С августа 1994 года по февраль 2002 года – главный архитектор Сакского района. С февраля 2002 года по март 2004 года – ведущий специалист Государственной земельной инспекции. С марта 2004 года по декабрь 2007 года – начальник инспекции ГАСК, главный архитектор Сакского района. С декабря 2007 года по ноябрь 2010 года – первый заместитель Председателя Сакской РГА. С ноября 2010 года по октябрь 2011 года – Служба занятости – безработный. С октября 2011 года по июль 2013 год – заместитель директора КП «ЗОЕ». С июля 2013 года по сентябрь 2014 год – начальник организационного отдела, специалист I категории отдела градостроительства и архитектуры Сакской РГА.
С 1993 года председатель Сакской районной организации Русская община Крыма.
Женат. Член Союза литераторов России
Имеет награды: ветеран Русской общины Крыма; орден «Казацкая Слава»;
почетный знак «За вклад в укрепление сотрудничества с Россией»;
2015 год – медаль «За защиту Республики Крым».
Депутат Верховного Совета Крыма второго созыва 1994–1998 годов. Депутат Верховной Рады Автономной Республики Крым пятого созыва 2006–2010 годов.
С 19 сентября 2014 года по сентябрь 2019 – депутат Государственного Совета Республики Крым первого созыва.
Публикации: Стихи проза:
Альманах «След Крымская палитра» 2017 год.
Литературно-исторический журнал «Что есть Истина?» 2017
Газеты «Литературный Крым», «Отражение».
Информационно-аналитический портал «Крымское эхо»
Электронная почта и телефон Станислава Матвеева
Мы установили стандарт поиска писем
Нам доверяют более 7,2 миллиона пользователей и 95% из S&P 500.
Нам не с чего начать.Обыскивать Интернет круглосуточно — это не поможет. RocketReach дал нам отличное место для старта. Теперь у нашего рабочего процесса есть четкое направление — у нас есть процесс, который начинается с RocketReach и заканчивается огромными списками контактов для нашей команды продаж … это, вероятно, сэкономит Feedtrail около 3 месяцев работы с точки зрения сбора потенциальных клиентов.
Мы можем переключить наше внимание на поиски клиента прямо сейчас!
Отлично подходит для создания списка потенциальных клиентов.Мне понравилась возможность определять личные электронные письма практически от любого человека в сети с помощью RocketReach. Недавно мне поручили проект, который рассматривал обязанности по связям с общественностью, партнерству и разъяснительной работе, и RocketReach не только связал меня с потенциальными людьми, но и позволил мне оптимизировать мой поисковый подход на основе местоположения, набора навыков и ключевого слова.
— Брайан Рэй , Менеджер по продажам @ Google
До RocketReach мы обращались к людям через профессиональные сетевые сайты, такие как Linkedln.
Но нам было неприятно ждать, пока люди примут наши запросы на подключение (если они вообще их приняли), а их отправка обходится слишком дорого … это было серьезным ударом скорости в нашем рабочем процессе и источником нескончаемого разочарования. Благодаря огромному количеству контактов, которые мы смогли найти с помощью RocketReach, платформа, вероятно, сэкономила нам почти пять лет ожидания.
Это лучшая и самая эффективная поисковая система по электронной почте, которую я когда-либо использовал, и я пробовал несколько.И по объему поисков, и по количеству найденных точных писем я считаю, что он превосходит другие. Еще мне нравится макет, он приятный на вид, более привлекательный и эффективный. Суть в том, что это был эффективный инструмент в моей работе, как некоммерческой организации, обращающейся к руководству.
До RocketReach процесс поиска адресов электронной почты состоял из поиска в Интернете, опроса общих друзей или преследования в LinkedIn.
Больше всего меня расстраивало то, как много времени все это занимало. Впервые я использовал RocketReach, когда понял, что принял правильное решение. Поиск писем для контактов превратился в одноразовый процесс, а не на неделю.
Поиск электронных писем для целевого охвата был вручную и занимал очень много времени. Когда я попробовал RocketReach и нашел бизнес-информацию о ключевых людях за считанные секунды с помощью простого и непрерывного процесса, меня зацепило! Инструмент сократил время на установление связи с новыми потенциальными клиентами почти на 90%.
Оптогенетика — тема исследовательской работы в области биологических наук. Скачайте научную статью в формате PDF и читайте ее бесплатно в открытом научном центре CyberLeninka.
Доступно на сайте www.
sciencedirect.com
ScienceDirect
Вестник Санкт-Петербургского политехнического университета: физико-математические науки 000 (2016) 1-8
www.elsevier.com / locate / spjpm
Новый метод изучения нейрональной активности: Оптогенетика
Ерофеев Александр Иванович *, Матвеев Максим Викторович, Терехин Станислав Григорьевич, Захарова Ольга Александровна,
Плотникова Полина Владимировна, Власова Ольга Леонидовна
Санкт-Петербургский политехнический университет Петра Великого, Санкт-Петербург, 195251, ул. Политехническая, 29, Российская Федерация
Доступно онлайн xxx
Аннотация
Статья посвящена проблемам реализации и применения оптогенетических методов, используемых для выявления причин различных заболеваний, мониторинга биохимических процессов жизнедеятельности клеток и изучения различных организмов.
Рассмотрены проблемы доставки, встраивания и мониторинга экспрессии генов опсинов в интересующий геном клетки. В статье представлены параметры и свойства различных опсинов, а также основные способы достижения точного оптического контроля над клеткой с помощью опсинов. Указаны правила выбора параметров светового пучка и особенности его нанесения. Были проанализированы и даны характерные свойства различных методов измерения и регистрации экспериментальных величин.
Copyright © 2016, Санкт-Петербургский политехнический университет. Производство и хостинг Elsevier B.V.
Это статья в открытом доступе согласно лицензии CC BY-NC-ND (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/).
Ключевые слова: оптогенетика; Опсин; Светочувствительность; Каналродопсин; Галородопсин; Лентивирус; Трансгенная мышь; Потенциал действия; Волокно.
Введение
Оптогенетика — это принципиально новый метод исследования, который был разработан в последнее десятилетие в лаборатории Дейссерота Стэнфордского университета (Карл Дейссерот — профессор биоинженерии, психиатрии и поведенческих наук).
Оптогенетика включает изучение того, как клетки функционируют, вводя в их мембраны светочувствительные компоненты; эти компоненты способны изменять свойства ячеек-носителей в ответ на облучение световым лучом определенной длины волны и, таким образом, действуют как флуоресцентные метки носителя.
* Автор, ответственный за переписку. Электронные адреса: [email protected] (А. И. Ерофеев), [email protected] (М. В. Матвеев), stasok32 @ yandex.ru (С. Г. Терехин), ozakharpba92 @ gmail.com (О.А. Захарова), [email protected] (П.В. Плотникова), [email protected] (О.Л. Власова).
Важно отметить, что этот метод предполагает создание генетически закодированных конструкций, то есть оптогенетических инструментов, которые, попадая в определенные клетки, изменяют свою физиологию под воздействием света. Эти инструменты позволяют контролировать с помощью света электрическую активность определенных типов нейронов, передачу сигналов клеток и другие процессы.
Для применения метода также необходимо создание систем доставки света в ткани и регистрации результатов экспериментов.Хотя отдельные элементы этих методов существуют с 1970-х годов, они были объединены в оптогенетические методы только в 2005 году [1]. Изначально разработанная технология была направлена на нейробиологические исследования. Однако возможности оптогенетики гораздо шире. Метод позволяет контролировать определенные события (с разрешением по времени порядка миллисекунд, что соответствует длительности биологических процессов) в определенных типах клеток [2-5].
http: // dx.doi.org/10.1016/j.spjpm.2015.12.001
2405-7223 / Copyright © 2016, Санкт-Петербургский политехнический университет. Производство и хостинг Elsevier B.V. Это статья в открытом доступе по лицензии CC BY-NC-ND (http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/). (Экспертная оценка под руководством Санкт-Петербургского политехнического университета).
2 Ерофеев А.
И. и др. / Санкт-Петербург Вестник Петербургского политехнического университета: Физико-математические науки 000 (2016) 1-8
Этот анализ особенно важен, так как клеточные события должны рассматриваться только в контексте других событий, происходящих в отдельных тканях и в организме в целом.
Краткая история проблемы
Фрэнсис Крик, первооткрыватель структуры ДНК, в 1979 году предположил, что одна из основных проблем в области нейробиологии — выборочный контроль определенных типов клеток мозга при условии, что остальные клетки остаются нетронутыми [6]. Поскольку невозможно возбудить определенную область мозга электродами с необходимой точностью, а действие различных лекарств слишком медленное, Крик пришел к выводу, что видимый свет обладает всеми свойствами, позволяющими использовать его в качестве инструмента контроля.Однако в то время не существовало методов, позволяющих сделать определенные клетки светочувствительными.
Еще раньше, в 1971 году, Штокениус и Остерхельт показали, что бактериородопсин действует как ионный насос, который может быстро активироваться фотонами видимого света
[7]. Позже были открыты другие члены этого семейства, галородопсин (1977) и каналродопсин (2002).
Тем не менее, долгое время существовало общее мнение, что такая комбинация оптических и генетических методов не даст желаемого эффекта: во-первых, потому, что чужеродные мембранные белки, введенные в клетку, могут быть токсичными; во-вторых, многие ученые полагали, что индуцированные светом токи слишком малы.Кроме того, для поглощения фотонов бактериальным опсинам необходим химический кофактор, полностью трансретинальный.
Летом 2005 г. было опубликовано исследование, демонстрирующее, что можно использовать бактериальный опсин без добавления каких-либо других частей, компонентов или реагентов [1], при этом нейроны становятся светочувствительными.
В последующие годы другие исследователи обнаружили, что бактериородопсин и галородопсин, а также каналродопсин способны быстро включать и выключать нейроны без какого-либо риска для клеток в ответ на облучение светом с различной длиной волны.Ткани позвоночных уже содержат полностью транс-ретиналь, поэтому оптогенетический контроль возможен в интактных тканях мозга и даже у свободно перемещающихся животных.
Современные достижения
За последние семь лет был проведен ряд в высшей степени интересных экспериментов с использованием новой технологии. Новые опсины находятся в стадии разработки с целью применения оптогенетики в широком спектре исследований на различных организмах. Например, в 2008 г. канал родопсина ВЧРи чувствителен к желтому свету вместо
. синего цвета были получены из водорослей Volvox carteri [9].Одновременно используя несколько типов канальных родопсинов, экспериментатор может одновременно управлять смешанными популяциями клеток: одни команды могут подаваться клеткам первого типа желтым светом, а другие — синим светом.
Также были созданы так называемые «быстрые» и «медленные» опсины, позволяющие контролировать продолжительность потенциала действия. Первые опсины способны создавать потенциалы действия до 200 раз в секунду [10]. Уже созданы опсины, чувствительные к свету, частота которого находится на границе между видимой и инфракрасной областями.Волны этой частоты глубже проникают в ткани и легче фокусируются.
Одна из самых интересных возможностей оптогенетических приложений — это управление не только электрическими событиями в нейроне, но и некоторыми биохимическими событиями. Известно, что многие лекарственные препараты действуют через взаимодействие с семейством мембранных рецепторов (GPCR). Эти рецепторы передают внешние сигналы от некоторых соединений (лекарств) в клетки, изменяя таким образом внутриклеточную передачу сигналов, например.g., уровни ионов кальция. Если к GPCR добавить светочувствительный домен родопсина, можно получить рецепторы, чувствительные к зеленому свету.
Эти рецепторы получили название optoXRs [11]. Когда однокомпонентный ген optoXR был доставлен через вирус в мозг лабораторных животных, был успешно осуществлен клеточно-специфический контроль с помощью света над определенными путями передачи биохимических сигналов [11].
Разработка новых волоконно-оптических инструментов позволила доставлять оптические лучи в любую область мозга свободно движущихся животных.Кроме того, был создан метод, позволяющий одновременно исследовать оптическое возбуждение и регистрировать электрические импульсы. В настоящее время возможно, например, непосредственно измерять электрическую активность нейронных ансамблей, отвечающих за двигательные функции, одновременно контролируя их с помощью опсинов.
Первые оптогенетические исследования на свободно передвигающихся животных были направлены на изучение нейронов, синтезирующих нейромедиатор гипокретина [12]. Считается, что эти клетки ответственны за нарушение сна нарколепсии.
Было обнаружено, что именно эти клетки проявляют определенные типы электрической активности, ведущей к пробуждению. Оптогенетика также помогла доказать, что дофаминергические нейроны ответственны за чувство радости [13].
Исследования новейших методов лечения болезни Паркинсона [14,15] привели к одним из самых известных оптогенетических экспериментов. Это состояние характеризуется нарушением передачи информации в нейронах компактной части черной субстанции, ответственных за двигательную функцию.Глубокая стимуляция мозга используется для лечения болезни Паркинсона с 1990-х годов. Эта процедура включает в себя отправку чередующихся электрических импульсов на
.Ерофеев А.И. и др. / Санкт-Петербург Вестник Петербургского политехнического университета: Физико-математические науки 000 (2016) 1-8 3
конкретных областей мозга с использованием имплантированных инструментов. Однако потенциальная эффективность лечебной стратегии сильно ограничена, поскольку электроды неизбирательно стимулируют отдельные клетки мозга.
Фундаментальное понимание этого метода лечения было получено благодаря оптогенетике. Когда были активированы разные типы нейронов, у мышей с паркинсонизмом были обнаружены неожиданные результаты. По-видимому, наибольшее терапевтическое усилие было достигнуто не за счет стимуляции определенного типа клеток, а за счет контроля активности соединяющихся аксонов.
Генетические методы доставки гена опсина конкретным нейронным популяциям
гены опсина могут избирательно экспрессироваться в определенном заранее выбранном типе нейронов мозга.Давайте обсудим основные стратегии, эффективность которых доказана для достижения экспрессии in vivo. Один из самых распространенных методов доставки генетического материала — использование лентивирусов. Оптимальное время экспрессии гена — две недели после инъекции. Основные преимущества этого метода заключаются в высоком уровне экспрессии генов и в том, что необходимая экспрессия сохраняется в течение нескольких лет.
К недостаткам использования лентивирусов можно отнести недостаточную специфичность и низкий уровень экспрессии нескольких клеточно-специфичных промоторов.В настоящее время доставка генного материала лентивирусами используется практически во всех экспериментах на млекопитающих. Другой распространенный метод — доставка материалов аденоасоциированными вирусами (AAV). Оптимальное время экспрессии гена — 3 недели после инъекции. Менее популярным методом является использование Cre-зависимых систем экспрессии AAV. Срок экспрессии — 3 недели. Преимущества и недостатки второго и третьего методов аналогичны лентивирусному.
Вирусные системы
В отличие от большинства генетических методов, вирусные векторы на основе лентивирусов и AAV не требуют использования трансгенных животных моделей.Эти методы позволяют получить высокий уровень экспрессии гена опсина как у грызунов, так и у приматов на период до нескольких месяцев. Используемые в экспериментах векторы на основе лентивирусов и AAV имеют следующие параметры:
1.
имеется более 109 единиц трансдукции лентивирусов;
2. Существует более 1012 копий генома AAV.
Обычно экспрессия гена опсина в мозге грызунов достигает необходимого уровня через три недели после инъекции AAV и через две недели после инъекции лентивируса.Более
Может пройти шесть недель, прежде чем будет достигнут стабильный уровень экспрессии в дистальных концах аксонов.
Электропорация
В определенные дни эмбрионального развития можно использовать метод внутриутробной электропорации. Этот метод может обеспечить адресную доставку генов в корковые слои I и III, а также в нейроны полосатого тела и гиппокампа [16-19]. В отличие от вирусных методов, электропорация может доставлять ДНК любого размера с большими промоторными сегментами для достижения высокой клеточной специфичности.Электропорация также позволяет вводить многочисленные копии генов.
Трансгенные мыши
Требуемая экспрессия гена опсина может быть достигнута с помощью кассет трансгенов, несущих рекомбинантные промоторы, и трансгенных конструкций на основе бактериальных искусственных хромосом.
Было создано несколько линий трансгенных мышей, экспрессирующих ChR2 под действием Thyl промотора, без изменения их репродуктивной способности или каких-либо заметных изменений в поведении [20,21].
Cre-зависимые экспрессионные системы
Несмотря на то, что клеточно-специфические промоторы эффективны для достижения требуемых уровней экспрессии в определенных типах нейронов, некоторые промоторы обладают слабой транскрипционной активностью, и поэтому их невозможно использовать для достижения уровня экспрессии, при котором опсины могут эффективно индуцировать потенциал действия.Были созданы специальные Cre-зависимые AAV-векторы для повышения транскрипционной активности. Эти векторы содержат кассеты трансгенов, экспрессирующие только в присутствии Cre в линиях трансгенных животных. Следовательно, чтобы увеличить экспрессию в клетках определенного типа, необходимо выбрать подходящую линию мышей.
Основные стратегии оптического контроля опсинами
Обсудим основные экспериментальные методы достижения оптического контроля с помощью опсинов.
Быстрое возбуждение — канальные родопсины (ЧР)
В некоторых случаях бактериальный ген родопсина, введенный в нейроны, может вызывать индуцированный светом фототок. В настоящее время в основном используются модифицированные опсины. В частности, некоторые кодоны водорослей были заменены кодонами млекопитающих, что значительно увеличило экспрессию этих генов. Конечно, изменение кодонов может вызвать
4 Ерофеев А.И. и др. / Санкт-Петербург Вестник Петербургского политехнического университета: Физико-математические науки 000 (2016) 1-8
непредвиденных эффектов, когда наряду с повышенной экспрессией в нейронах млекопитающих наблюдается угнетение некоторых других функций или снижение экспрессии в других типах клеток.Например, введение мутанта h234R в ChR2 приводит к двукратному увеличению фототока при длительной стимуляции, тогда как временная точность резко снижается по мере уменьшения скорости закрытия канала [22].
Значительное красное смещение в спектре оптического поглощения водорослевого белка VChR1 [23], стимулированного желтым светом (длина волны возбуждения 590 нм), без какого-либо влияния на ChR2 (длина волны возбуждения 470 нм), позволяет контролировать комбинированное возбуждение in vivo.Большинство изученных на сегодняшний день канальных родопсинов имеют относительно низкую одноканальную проводимость и широкую катионную селективность. Комбинированные методы, в том числе с использованием VCHR1, позволяют получать различные характеристики клеточных фототоков.
Например, исследование мутанта L132C [24] показало, что его активация приводит к незначительным фототокам ионов кальция при физиологических концентрациях кальция, а увеличение цитозольной концентрации Ca2 + в основном вызывается активацией эндогенных потенциалзависимых кальциевых каналов из-за деполяризация нейрональной мембраны [25].Всегда следует учитывать уровни проводимости второго и даже третьего порядка, особенно когда наблюдается высокая проводимость ионов кальция.
Различные типы клеток и даже разные клеточные области могут по-разному индуцировать, транспортировать или реагировать на повышенные концентрации кальция. Последние исследования моделирования, в которых клеточные ответы на фотостимуляцию были интегрированы с моделью Ходжкина-Хаксли [26], могут быть расширены и дополнены проводимостью второго порядка, что означает, что теперь можно предсказать клеточные реакции на различные методы фотостимуляции.
Быстрое ингибирование — галородопсины (NpHR)
Ингибирование также играет важную роль в оптогенетических исследованиях активности нейронов и нейронных ансамблей. В этих исследованиях используется галородопсин (HR), индуцирующий электрогенный ток Cl-, но обычно он оказывает десенсибилизирующее действие. Однако ген гомолога Natronomonas pharaonis [32-34] способен индуцировать стабильный фототок [35] с максимумом длины волны 590 нм (возбуждение на этой длине волны не вызывает никакого ответа от ChR2, что позволяет активировать ChR2 и NpHR независимо от двунаправленной модуляции активности).
В отличие от возбуждающего ChR, NpHR требует постоянного освещения. Несмотря на то, что ингибирование с помощью NpHR было
успешно зарекомендовал себя на модели свободно движущихся червей в тонких срезах мозга млекопитающих [35], а также в культуре нейронов [36], что потребовалось несколько лет для достижения аналогичных результатов для интактных млекопитающих из-за проблем с мембранным транспортом. что требует использования дополнительных методов.
Opsin eNpHR2.0 был сконструирован различными методами; он характеризуется более высокими значениями тока [37,21].Это позволило использовать его для интактных тканей грызунов [38], а также для тканей приматов и человека [39]. В конечном итоге был создан eNpHR3.0 с еще более высокими значениями фототока для умеренной интенсивности света в желтом диапазоне или с красным смещением (до 680 нм) [26].
Следует отметить, что для экспериментов по ингибированию функции нейронов лучше использовать двунаправленное управление и учитывать стабильность фототоков ингибирующих опсинов.
Наконец, следует тщательно контролировать дозы облучения, в частности, чтобы предотвратить перегрев тканей при постоянном воздействии.Вот почему так важно контролировать интенсивность света, необходимую для ингибирования [40].
Опсины со ступенчатой функцией (SFO)
Проводимость ChR2 дикого типа деактивируется после прекращения фотостимуляции (она длится около 10 мс), в то время как мутантный ChR2 (C128X) (мутации в цистеин-128 и аспартат-156) деактивируется гораздо медленнее [27,28]. Например, мутантные белки, замещенные C128T, C128A и C128S, характеризуются временем реакции 2, 42 и 100 с соответственно [27].Этот стабильный индуцированный синим светом фототок можно остановить импульсами желтого света (560590 нм). Мутантные гены этого класса называются опсинами со ступенчатой функцией (SFO), поскольку они позволяют ступенчато управлять мембранным потенциалом. Этот тип контроля, скорее всего, приведет к порогу потенциала действия и увеличит вероятность эндогенного синаптического выхода [27].
Ключевые различия между SFO и ChR
Отметим два из этих отличий. Во-первых, клеточная светочувствительность SFO выше, чем у ChR; это результат накопления открытого канала во время светового импульса [27,29].Второе различие между SFO и ChR обусловлено асинхронной природой SFO-опосредованной активности нейронов, которая не вовлекает все экспрессирующие нейроны в единый паттерн, вызванный фотостимуляцией.
В настоящее время существуют SFO со временем деактивации до 30 мин [30]; это позволяет привести экспрессирующие нейроны к стабильному потенциалу покоя с последующим удалением источника света, т.е. позволяет проводить
Ерофеев А.И. и др./ Ул. Вестник Петербургского политехнического университета: Физико-математические науки 000 (2016) 1-8 5
последующий поведенческий или физиологический эксперимент без какого-либо света или другого оборудования. Более того, использование продолжительных световых импульсов низкой интенсивности устраняет неоднородности в ответе экспрессирующих клеток.
В этом случае даже большие объемы тканей могут в конечном итоге быть доведены до уровней насыщения.
Однако, несмотря на широкий экспериментальный потенциал SFO, их использование всегда должно сопровождаться дополнительными электрофизиологическими исследованиями.Это необходимо для правильной интерпретации полученных данных.
Но даже несмотря на то, что перечисленные выше ХР обладают множеством полезных свойств, ни один из них не способен создавать последовательности спайков с частотами выше 40 Гц, в то время как многие типы нейронов и их физиологические процессы требуют высокочастотных последовательностей спайков (более 40 Гц). Даже с ChR2 дикого типа (10 мс), а также h234R (20 мс) контроль точности ограничен на высоких частотах. Замена остатка Glu-123 треонином или аланином приводила к ускорению кинетики закрытия канала с 10 до 4 мс из-за умеренного снижения фототока, что значительно улучшало точность оптогенетического контроля [10].Мутанты E123 уникальны среди ChR, поскольку они устраняют чувствительность кинетики канала к мембранным потенциалам, независимо от того, действуют ли они отдельно или в комбинации с другими мутантами h234R и T159C [10,31].
После устранения этих нелинейных и нестационарных эффектов становится легче прогнозировать и моделировать отклик канала. Опсины этого класса (отдельные мутанты E123 или комбинации других мутантов [10]) называются ChETAs (ChRE123T / A). ChETA можно использовать не только для нейронов, требующих высокочастотных цепочек спайков, поскольку они помогают уменьшить количество дополнительных спайков наряду с ложно продолжительной деполяризацией.Было показано, что ChETA обеспечивают повышенную эффективность в интактных тканях мозга млекопитающих [10]; в то же время быстрая деактивация обычно приводит к снижению эффективной клеточной чувствительности к длительным световым импульсам, поскольку меньше каналов остается открытым.
Фармакологическая, оптогенетическая и электрическая стимуляция
Эти типы стимуляции отличаются от естественной синаптической передачи из-за изменений проводимости ионных потоков и мембранных потенциалов.Любой из этих типов стимуляции может влиять на внутриклеточные мембраны, эндоплазматическую сеть, ядерные комплексы, синаптические везикулы и митохондрии.
Эти факторы необходимо учитывать, особенно при изучении отдельных нейронов. Несмотря на новизну, точность и специфичность оптогенетических методов, их результаты необходимо сравнивать с результатами электростимуляции в аналогичных условиях. Хотя оптогенетика позволяет объяснить, как именно
нейронов и нейронных ансамблей, экспериментальные результаты, как правило, сильно зависят от типов нейронов и параметров стимуляции (частота, продолжительность, амплитуда и т. Д.). Выбор опсина (например, h234R или L132C) также имеет большое значение.
В природе встречается огромное количество генов микробных опсинов, что открывает широкие возможности для создания новых оптогенетических инструментов.
Инструменты для регулирования биохимической сигнализации
Вышеописанные гены микробного опсина (тип I) кодируют ионные каналы, которые контролируют возбудимость нейронов, изменяя их мембранный потенциал выше или ниже порога генерации потенциала действия.
Хотя преимущества этого подхода заключаются в его скорости и точности, некоторые эксперименты требуют временной и точной модуляции внутриклеточных процессов.
Существует еще один тип опсинов (тип II), например, светочувствительные белки в глазах млекопитающих; эти белки способны не только индуцировать фототок при воздействии света, но и действовать как рецепторы G-сопряженных белков (GPCR) и, следовательно, принимать участие во внутриклеточной передаче сигналов. Можно контролировать медленное торможение [41] или возбуждение [42].В настоящее время разрабатывается большое количество химер [43] между родопсинами позвоночных и семейством GPCR, которые могут служить в качестве однокомпонентных средств контроля (среди них дофаминергические, серотонинергические и адренергические рецепторы, которые играют важную роль в нейротрансмиссии и нейромодуляции). . Эти оптогенетические инструменты называются optoXRs, и они позволяют контролировать внутриклеточную передачу сигналов для изучения поведения свободно перемещающихся мышей [11].
Скорость и точность, достигаемые методами биохимической оптогенетики, открывают возможности, недостижимые фармакологическими или генетическими методами.Активное развитие этого направления оптогенетики позволяет использовать эти технологии практически для всех типов клеток.
Выбор параметров светового пучка и доставка света
После того, как экспрессия опсина была достигнута в нейронах, представляющих интерес для исследователей, возникла проблема доставки светового луча. Требования к параметрам пучка меняются в зависимости от условий эксперимента. Например, параметры пучка, необходимые для изучения быстрых колебаний в тонких срезах мозга при использовании нескольких опсинов in vitro, отличаются от параметров пучка, необходимых для изучения эффектов длительной стимуляции in vivo определенных участков мозга животных [44].Параметры фототоков, индуцируемых в нейронах световыми импульсами
6 Ерофеев А.
И. и др. / Санкт-Петербург Вестник Петербургского политехнического университета: Физико-математические науки 000 (2016) 1-8
зависят от многих факторов. Некоторые из них — это тип экспрессируемого опсина, длина волны, интенсивность и продолжительность облучения и даже события, которые произошли до начала облучения. Если не все молекулы канального родопсина восстанавливают свое исходное состояние после предыдущего воздействия, первоначальная реакция на световой импульс уменьшается.
Параметры активации для различных опсинов
Для химер ChR2, ChR2 (h234R), ChR1 / 2, семейства опсинов ХЭТА (производный от Chlamydomonas reinhardtii) длина волны возбуждения составляет 470 нм, в то время как основная функция этих опсинов — деполяризация клеточной мембраны. Это семейство опсинов способно к быстрому включению / выключению, поэтому эти опсины лучше всего подходят для точной активации нейронов. Замена h234R приводит к большему количеству фототоков по сравнению с ChR2 дикого типа.
В частности, химеры ChRi / ChR2 и ChETA производят выбросы до 200 Гц.
Следующая группа опсинов — это ступенчато-функциональные опсины (SFO): ChR2 (C128A), ChR2 (C128S), ChR2 (C128T) (производные от Chlamydomonas reinhardtii). Длина волны возбуждения составляет 470 нм, а для ингибирования используется световой луч с длиной волны 546 нм. Основная функция этих опсинов — это также деполяризация клеточной мембраны. ChR2 (с точечными мутациями) характеризуются медленной или оптически переключаемой дезактивацией.Замена C128A и C128S приводит к самой продолжительной активации и наивысшей светочувствительности, в то время как C128T сохраняет высокую временную точность. SFO можно включать и выключать с помощью синего и зеленого световых импульсов.
ВЧР1 (производный от Volvox carteri) имеет длину волны возбуждения 535 нм, и его основной функцией также является деполяризация клеточной мембраны. Красный сдвиг в спектре активации (относительно ChR2) позволяет осуществлять комбинированный контроль.
NpHR, eNpHR (полученный из Natronomonas pharao-nis) имеют длину волны возбуждения 589 нм, но их основная функция — гиперполяризация клеточной мембраны.2AR (полученные синтетическим путем) имеют длину волны возбуждения 500 нм; их основная функция — биохимический контроль клеточной мембраны. В эту группу опсинов входят активируемые светом GPCR (активируемые через G-белок).
При разработке системы доставки света для активации опсина необходимо учитывать коэффициент поглощения фотонов с определенной длиной волны. Он пропорционален световому потоку, который, в свою очередь, равен
. фотонов на единицу поверхности в единицу времени.Однако в экспериментах удобнее использовать другое количество; это плотность светового потока, измеряемая в мВт / мм2 и определяемая как световой поток, умноженный на энергию фотона. Для канала родопсина ChR2 дикого типа со стандартными уровнями экспрессии и освещением на длине волны 473 нм плотность потока, необходимая для инициации аксонального потенциала, составляет 1-5 мВт / мм2.
Как отмечалось ранее, требования к продолжительности освещения зависят от условий различных оптогенетических экспериментов.В случае оптогенетического ингибирования временной диапазон определяется продолжительностью этого ингибирования (плотность потока 1-5 мВт / мм2), в то время как для бистабильного оптогенетического контроля требуется короткий период времени, а световой луч должен иметь гораздо меньшую плотность потока (менее 0,01 мВт / мм2).
Для экспериментов in vitro, когда образец ткани исследуется под микроскопом, наиболее подходящие источники света, то есть галогеновые / ксеноновые лампы, светодиоды, лазеры, могут быть размещены непосредственно вдоль луча микроскопа.м волокна) лучше всего подходят для исследований in vivo на свободно перемещающихся животных. Светодиоды также могут использоваться для стимуляции корковых слоев, а тонкие оптические волокна должны использоваться для управления более глубокими областями мозга. Оптические волокна используются для изготовления так называемых оптродов, которые представляют собой инструменты для одновременной регистрации электрофизиологических параметров и оптически возбуждающих опсинов.
Толщина волокна также выбирается в зависимости от характера исследуемого объекта. Например, для мышей с неограниченным движением необходимая толщина не более 300 мкм, а для крыс — 400 мкм.м расстояние от конца волокна составляет около 10% от начального.
В настоящее время Лаборатория молекулярной нейродегенерации разрабатывает программно-аппаратный комплекс для оптогенетических исследований. Предлагаемый пакет представляет собой источник светового излучения, состоящий из нескольких ярких светодиодов, со специальным программным обеспечением с запрограммированными необходимыми экспериментально подобранными параметрами диодов для опсинов.
Методы регистрации экспериментальных данных
Для оптогенетического контроля используются различные методы измерения экспериментальных параметров.В первую очередь, это методы получения и анализа изображений
.Ерофеев А.И. и др. / Санкт-Петербург Вестник Петербургского политехнического университета: Физико-математические науки 000 (2016) 1-8 7
с использованием различных красителей, которые включают Ca2 + -специфические красители (например, фура-3, Fluo-5F), а также красители, чувствительные к напряжению (VSD, например, RH-155).
Такие методы эффективны для измерения электрической активности в больших популяциях клеток ex vivo и in vivo с высоким временным разрешением.Двухфотонный микроскоп можно использовать для визуализации с помощью Са2 + -специфических красителей, поскольку шумы от фотоактивации канального родопсина практически отсутствуют во время двухфотонного возбуждения. Красители, чувствительные к напряжению, представляют собой липофильные молекулы, оптическое поглощение которых зависит от мембранного потенциала. Наряду с высокоскоростными камерами для регистрации изменений оптического сигнала используется визуализация VSD, позволяющая обнаруживать изменения нейронной электрической активности с высоким пространственным и временным разрешением (порядка мкм и мс).м дальность. Такая разница в длинах волн позволяет одновременно оптически стимулировать опсины и обнаруживать изображения.
Другой класс методов измерения параметров оптогенетических экспериментов заключается в одновременном контроле поведения животных и электрофизиологической регистрации.
Для этой цели были разработаны специальные инструменты на основе оптического волокна для доставки световых лучей в область экспрессии генов опсина и для электрофизиологических измерений.
Заключение
В данной статье мы подробно рассмотрели суть оптогенетического метода, его основные составляющие и области применения.Этот метод в настоящее время быстро развивается и совершенствуется и применяется во все большем количестве научных областей. Наибольший интерес авторов представляет оптогенетический подход к изучению различных нейродегенеративных заболеваний. Например, в 2013 г. аномалии синаптической передачи в культуре кортикальных и полосатых нейронов были продемонстрированы на мышиных моделях болезни Хантингтона с использованием оптогенетического метода [45]. Изучение этого типа проблем является предметом текущих и будущих исследований авторов.
Благодарность
Авторы выражают благодарность И.Б.
Безпроз-ванны, заведующему лабораторией молекулярной нейродегенерации, доктору биологических наук и заведующему кафедрой Карла Дж. И Гортензии М. Томсен по исследованию болезни Альцгеймера, а также всей команде лаборатории за консультациями и помощью в исследованиях.
Часть исследования, посвященная стадированию и апробации оптогенетических методов, поддержана грантом Российского научного фонда № 14/2008.14-25-0024.
Список литературы
[1] E.S. Бойден, Ф. Чжан, Э. Bamberg, et al., Миллисекундная шкала времени, генетически направленный оптический контроль нейронной активности, Nat. Neu-rosci. 8 (9) (2005) 1263-1268.
[2] К. Дейссерот, Г. Фэн, А.К. Маевска и др., Оптические технологии следующего поколения для освещения генетически нацеленных цепей мозга, J. Neurosci. 26 (41) (2006) 10380-10386.
[3] М. Сканциани, М.Хойссер, Электрофизиология в век света, Nature 461 (7266) (2009) 930-939.
[4] К. Деиссерот, Управление мозгом с помощью света, Sci. Am 303 (5) (2010) 48-55.
[5] К. Дейссерот, Оптогенетика, Nat. Методы 8 (1) (2011) 26-29.
[6] Ф. Х. Крик, Размышляя о мозге, Sci. Являюсь. 241 (3) (1979) 219-232.
[7] D. Oesterhelt, W. Stoeckenius, Родопсин-подобный белок пурпурной мембраны Halobacterium halobium, Nat.New Biol. 233 (39) (1971) 149–152.
[8] Г. Нагель, Д. Оллиг, М. Фурманн и др., Каналродопсин-1: светозависимый протонный канал в зеленых водорослях, Science 296 (5577) (2002) 2395-2398.
[9] F. Zhang, M. Prigge, F. Beyriere, et al., Оптогенетическое возбуждение с красным смещением: инструмент для быстрого нейронного контроля, полученный из Volvox carteri, Nat. Neurosci. 11 (6) (2008) 631-633.
[10] Л.А. Гунайдин, О. Ижар, А. Берндт и др., Сверхбыстрый оптогенетический контроль, Nat.Neurosci. 13 (3) (2010) 387-392.
[11] Р.Д. Айран, К.Р. Томпсон, Л. Fenno и др., Точный во времени контроль внутриклеточной передачи сигналов in vivo, Nature 458 (7241) (2009) 1025-1029.
[12] A.R. Адамантидис, Ф. Чжан, А.М. Араванис и др., Нервные субстраты пробуждения, исследованные с оптогенетическим контролем гипокретиновых нейронов, Nature 450 (7168) (2007) 420-424.
[13] H.C. Цай, Ф. Чжан, А. Адамантидис и др., Фазовое возбуждение дофаминергических нейронов достаточно для формирования поведенческой обусловленности, Science 324 (5930) (2009) 1080-1084.
[14] В. Градинару, М. Могри, К.Р. Томпсон и др., Оптическая деконструкция нейронных схем паркинсонизма, Science 324 (5925) (2009) 354-359.
[15] А.В. Кравиц, Б. Фриз, П.Р. Паркер и др., Регулирование паркинсонического моторного поведения путем оптогенетического контроля цепей базальных ганглиев, Nature 466 (7306) (2010) 622-626.
[16] Х.
Адесник, М. Сканциани, Боковая конкуренция за корковое пространство с помощью горизонтальных цепей, специфичных для слоев, Nature 464 (7292) (2010) 1155-1160.
[17] В. Градинару, К.Р. Томпсон, Ф. Чжан и др., Стратегии нацеливания и считывания для быстрого оптического нейронного контроля in vitro и in vivo, J. Neurosci. 27 (52) (2007) 14231-1438.
[18] T.L. Льюис, Т. Мао, К. Свобода, Д.Б. Арнольд, Миозин-зависимое нацеливание трансмембранных белков на нейрональные дендриты, Nat. Neurosci. 12 (5) (2009) 568-576.
[19] L. Petreanu, D. Huber, A. Sobczyk, K. Svoboda, Channelrhodopsin-2-Assisted Circuit Mapping of Long Range Callosal Projection, Nat.Neurosci. 10 (5) (2007) 663-668.
[20] B.R. Arenkiel, J. Peca, I.G. Дэвисон и др., In vivo, индуцированная светом активация нервных цепей у трансгенных мышей, экспрессирующих канал родопсин-2, Neuron 54 (2) (2007) 205-218.
8 Ерофеев А.
И. и др. / Санкт-Петербург Вестник Петербургского политехнического университета: Физико-математические науки 000 (2016) 1-8
[21] S. Zhao, C. Cunha, F. Zhang, Q. Liu, B. Gloss, Улучшенная экспрессия галородопсина для светоиндуцированного подавления нейрональной активности, Brain Cell Biol.36 (1-4) (2008) 141-154.
[22] G. Nagel, M. Brauner, J.F. Liewald и др., Световая активация канала родопсина-2 в возбудимых клетках Caenorhabditis elegans вызывает быстрые поведенческие реакции, Curr. Биол. 15 (24) (2005) 2279-2284.
[23] F. Zhang, M. Prigge, F. Beyriere, et al., Оптогенетическое возбуждение с красным смещением: инструмент для быстрого нейронного контроля, полученный из Volvox carteri, Nat. Neurosci. 11 (6) (2008) 631-633.
[24] С.Кляйнлогель, К. Фельдбауэр, Р.Э. Демпски и др., Ультра светочувствительная и быстрая активация нейронов с помощью Ca2 + -проницаемого канала родопсина CatCh, Nat. Neurosci.
14 (4) (2011) 513-518.
[25] Ю.П. Чжан, Т. Oertner, Оптическая индукция синаптической пластичности с использованием светочувствительного канала, Nat. Метод 4 (2) (2007) 139141.
[26] В. Градинару, Ф. Чжан, К. Рамакришнан и др., Молекулярные и клеточные подходы для диверсификации и расширения оптогенетики, Cell 141 (1) (2010) 154-165.
[27] А. Берндт, О. Ижар, Л. А. Гунайдин и др., Бистабильные переключатели состояния нейронов, Nat. Neurosci. 12 (2) (2009) 229-234.
[28] C. Bamann, R. Gueta, S. Kleinlogel, et al., Структурное управление фотоциклом канального родопсина-2 с помощью межспиральной водородной связи, Biochemistry 49 (2) (2010) 267-278.
[29] I. Diester, M.T. Кауфман, М. Могри и др., Набор оптогенетических инструментов, разработанный для приматов, Nat. Neurosci. 14 (3) (2011) 387-397.
[30] О. Ижар, Л. Фенно, М. Пригге и др., Неокортикальный баланс возбуждения / торможения при социальной дисфункции и обработке информации, Nature 477 (7363) (2011) 171-178.
[31] A. Berndt, P. Schoenenberger, J. Mattis и др., Высокоэффективные канальные родопсины для быстрой нейрональной стимуляции при низких уровнях освещенности, Proc. Natl. Акад. Sci. 108 (18) (2011) 7595-7600.
[32] J.K. Lanyi, D. Oesterhelt, Идентификация связывающего сетчатку белка в галородопсине, J.Биол. Chem. 257 (5) (1982) 26742677.
[33] Б. Шарф, М. Энгельхард, Голубой галородопсин из Natronobacteriumpharaonis: регулирование длины волны анионами, Биохимия 33 (21) (1994) 6387-6393.
[34] М. Сато, М. Кубо, Т. Айзава и др., Роль предполагаемых анион-связывающих сайтов в цитоплазматических и внеклеточных каналах галлородопсина Natronomonas pharaonis, Биохимия 44 (12) (2005) 4775-4784.
[35] Ф. Чжан, Л.П. Ван, М.Браунер и др., Мультимодальный быстрый оптический опрос нейронных схем, Nature 446 (7136) (2007) 633639.
[36] X. Han, E.S. Бойден, Многоцветная оптическая активация, молчание и десинхронизация нейронной активности с временным разрешением с одним спайком, Plos One 2 (3) (2007) e299.
[37] В. Градинару, К.Р. Thompson, K. Deisseroth, eNpHR: Na-tronomonas halorhodopsin, усиленный для оптогенетических применений, Brain Cell Biol. 36 (1-4) (2008) 129-139.
[38] В.С. Sohal, F. Zhang, O. Yizhar, K. Deisseroth, Парвальбуминовые нейроны и гамма-ритмы улучшают работу коркового контура, Nature 459 (7247) (2009) 698-702.
[39] В. Бускамп, Дж. Дуэбел, Д. Баля и др., Генетическая реактивация фоторецепторов колбочек восстанавливает зрительные реакции при пигментном ретините, Science 329 (5990) (2010) 413-417.
[40] A.M. Араванис, Л.П. Ван, Ф. Чжан и др., Оптический нейронный интерфейс: контроль моторной коры грызунов in vivo с помощью интегрированных волоконно-оптических и оптогенетических технологий, J.Neural Eng. 4 (3) (2007) 143-156.
[41] X. Li, D.V. Гутьеррес, М. Hanson, et al., Быстрая неинвазивная активация и ингибирование нейронной и сетевой активности родопсином позвоночных и каналом родопсина зеленых водорослей, Proc.
Natl. Акад. Sci. 102 (49) (2005) 17816-17821.
[42] Z. Melyan, E.E. Tarttelin, J. Bellingham, et al., Добавление человеческого меланопсина делает клетки млекопитающих светочувствительными, Nature 433 (7027) (2005) 741-745.
[43] Дж.М. Ким, Дж. Хва, П. Гаррига и др., Управляемая светом активация передачи сигналов бета-2-адренорецептора химерным родопсином, содержащим цитоплазматические петли бета-2-адренергического рецептора, Биохимия 44 (7) (2005) 2284 -2292.
[44] Т. Брюгманн, Д. Малан, М. Гессе и др., Оптогенетический контроль сердечной мышцы in vitro и in vivo, Nat. Методы 7 (11) (2010) 897-900.
[45] Д.Н. Артамонов, В.В. Коржова, Д. Ву и др. Нарушения синаптической передачи при болезни Гентингтона на моделях кортико-стриатальных нейронов // Биохимия.(Моск.) 30 (4) (2013) 1-13.
Михаил Матвеев профиль игрока — ChessBase Players
- МАГАЗИН
-
ЯЗЫК
- ПОИСК
- ЛЕБЕДКА
-
СПИСКИ
- 100 лучших в мире
- Женщины Топ 100
- Мальчики до 20 лет, первые 100
- Топ-100 девушек до 20 лет
- Пользовательский список
* 1982 (39)
Лучший Эло
1985
Последний Elo
1973
Год рождения
1982
FideПолитика конфиденциальности | Отпечаток | Контакт
© 2017 ChessBase GmbH | Osterbekstraße 90a | 22083 Гамбург | Германия
Полиция, пожарная охрана — 3 февраля
Франклин
Кражи
- 2801 N.
Мортон-стрит, полицейское управление: женщина прибыла в 20:24. В четверг, когда она, должно быть, уронила свою дебетовую карту в McDonald’s, и с нее было снято несколько списаний. - 600 квартал улицы Яндес: в 15:53 явился мужчина. В четверг, когда с его крыльца украли пакет.
- 1435 Christian Blvd., Christina Place: Сотрудник сообщил в 15.01. В четверг, когда пропали лекарства.
- 2801 Н. Мортон-стрит, полицейское управление: мужчина явился в 1:38 p.м. В четверг, когда он потерял бумажник и кто-то воспользовался его кредитными картами.
- 3000 квартал улицы Н. Мортон: в 10:55 утра в четверг мужчина сообщил, что кто-то отрезал каталитический нейтрализатор на двух его грузовиках.
Округ Джонсон
Несчастные случаи с материальным ущербом
- 7:15 утра, четверг — State Road 44 W. и County Road 600 W., Trafalgar
- 18:51 Среда — County Road 500 W. и County Road 650 N. Гринвуд
- 6:40 стр.
м. Среда — County Road 500 W. и Lowe Drive, Trafalgar - 17:49 Среда — I-65 S. и State Road 44, Франклин
- 16:40 Среда — County Road 25 W. и County Road 375 S., Trafalgar
Следующие люди были недавно арестованы и помещены в тюрьму округа Джонсон:
Sierra A. Patterson, 29, 39 Conrey St., Shelbyville; арестован по обвинению в нарушении условного срока; проводится без залога.
Адам Кори Джонсон, 27, 1203 N.Fruitdale Road, Моргантаун; арестован по обвинению в нарушении условного срока; проводится без залога.
Майкл Р. Роджерс, 42, 3130 N. Countryclub Road, Мартинсвилл; арестован по обвинению в неуважении к суду; держится под залог 600 долларов.
Элиза Чжэ Андерсон, 20, 3152 Бранденбург Драйв, Индианаполис; арестован по обвинению в нанесении побоев и хулиганстве; выпущен под залог в 1000 долларов.
Кристин Джой Манси, 34, 602 W. River Road, Эдинбург; арестован на основании ордера вне округа; проводится без залога.
Нэнси Джоанн Шастин, 38, P.O. Box 1078, Сеймур; арестован на основании ордера за неявку в суд; держалась под залог 500 долларов.
Брачные лицензии
Вернисса Карвер и Клиффорд Тоуни, оба из Гринвуда
Эриан Мейджорс и Станислав Матвеев, оба из Уайтленда
Луиза Де Синети и Эмили Стауффер, оба из Франклина
, Гринвуд, Джина Пагилл Натаниэль Джонс и Ками Томпсон оба из ИндианаполисаФрэнк Сквиллас-младший.и Шейла Боулдс оба из Гринвуда
Пэйтон Паркер и Джеймс Хигдон оба из Франклина
Джами Хиллок из Гринвуда и Чад Исли из Лэйна
Шерил Бизанц из Гринвуда и Энтони Кинг из Бич Гроув
Дженника Болдридж из Франклина и Клэйтриджа , Colorado
Роберт Пидж из Уайтленда и Тоня Робинсон из Хендерсона, Кентукки
Верховный суд округа Джонсон 1
Midland Funding против Джереми Творека
American Express National Bank v.Dawn Shimp
Финансирование LVNV против Альфреда Нисена
Финансирование LVNV против Джаррета Хистона
Финансирование LVNV против Джады Творек
Cavalry SPV I, в качестве правопреемника Comenity Bank против Майкла Пауэлла
v.
Midland Funding против Билли Меффорда
Midland Funding против Lisa Houser
Финансирование LVNV против Донована Бина
Финансирование LVNV против Марио Гонсалеса
Финансирование LVNV против Кристины Сайзмор
LVNV ФинансированиеСкотт Хардисти
Ray Skillman Performance Ford против Дастина Друли, Тейлор Флора
Ray Skillman Performance Ford против Стивена Корбина, Шеннон Корбин
Ray Skillman Performance Ford против Сюзанны Эдвардс
LVNV Funding против Amanda Yaryan Midland Funding
против Энны КалвертMidland Funding против Стейси Брайтцке
Unifund CCR против Кристофера Лича
Ray Skillman Performance Ford против Kim Porter
Ray Skillman Performance Ford v.Сара Вудард
Ray Skillman Performance Ford против Джейсона Напьера
Ray Skillman Performance Ford против Троя Смита
Ray Skillman Performance Ford против Даниэль Клингер, Дайан Уильямс
Midland Funding против Венди Холтскло
Capital One Bank v.
Деннис Бейкер
Второй раунд против Талии Пауэлл
Ford Motor Credit Company против Шона Ванной
Capital One Bank против Майкла Хаттона
CACH против Лизы Холл
Midland Funding v.Лиза Спенсер
Финансирование LVNV против Джеймса Ловенштейна
Финансирование LVNV против Мелиссы Эйерс
Финансирование LVNV против Джона Уэста
Eagle Finance Company против Сабрина Томас
Ассоциированные компании по восстановлению портфеля против Russell Systems Wells
Джефферсон Кэпитал Джефферс
. Алешиа Гилман
Джефферсон Кэпитал Системс против Андреа Гоинг
Джефферсон Кэпитал Системс против Кэтрин Ларджент
Джефферсон Кэпитал Системс против Роды Хокетт
OneMain Financial Group против.Брайан Барр, Мишель Барр
Eagle Finance Company против Кристофера Бассингера
Скорая помощь в городке Браун против Дакоты Дженнингс
Финансирование LVNV против Мауры Грин
Финансирование LVNV против Симоны Хейвуд
Финансирование LVNV
LVNV 4 Mading против.
Creditmax, Inc. против Пенелопа Роуч
Ford Motor Credit Company против Брюса Александра
Capital One Bank против Бриджит Купер
Ассошиэйтс по восстановлению портфеля против Патти Прюитт
Financial Center First Credit Union v.Таннер Строуп
Franciscan Health Индианаполис против Крейга Гиддингса
Franciscan Health Indianapolis v. Marlana Huffman
Personal Finance Company против Молли Клэр
Portfolio Recovery Associates против Адриана Рока
000 Portfolio Recovery Associates
000 Portfolio Recovery Associates
000 Меритс 4 Recovery Associates против Брэдли Льюиса
Portfolio Recovery Associates против Стивена Худека
Portfolio Recovery Associates против Маркуса Рейеса
Velocity Investments, правопреемник LendingClub Corporation, правопреемник WebBank против.Бен Сименс
Ray Skillman Performance Ford против Джеймса Лонга, Эшли Лонг
SAC Finance, Inc. против Ронни Джонс-младшего
Capital One Bank против Клода Мюррея
Portfolio Recovery Associates против Дульсе Портильо
Возвращение портфеля Associates против Катрины Мюллер
Ray Skillman Performance Ford против Джастина Досса
Ray Skillman Ford против Доун Кун, Кортни Васкес
Franciscan Health Indianapolis против Аарона Хопкинса
Barclays Bank Delaware против.
Сьерра Хоган
Коллекция фильмов Bain Graffy: DVD-4265
ГОВОРУХИН, Станислав
Выходные / Uik-End
Кинокомпания Вертикаль, при поддержке Федерального фонда социальной и экономической поддержки отечественной кинематографии, Лукойл, Российские технологии, 2013
Продюсеры: Станислав Говорухин, Екатерина Маскина
Исполнительный продюсер: Александр Просянов
Сценарий: Станислав Говорухин, при участии Ксении Степанычевой, по идее Ноэля Калефа
Фотография: Юрий Клименко
Художник-постановщик: Валентин Гидулянов
Музыка: Артем Васильев
Игорь Лебедев Максим Матвеев Жанна, его жена Екатерина Гусева Иван Иванович, его зять Александр Домогаров Виктор Маковский, следователь Виктор Сухоруков Соня Юлия Хлынина Макс Вячеслав Чепуренко Инга Юлия Пересильд Мария, русская жена Ральфа Ольга Дыховичная Ральф Йохансон Саулиус Баландис Григорьев Виктор Сергачев Адвокат Александр Добровинский Следователь Елизавета Толубеева Певица Марина Орлова Вадим Илья Денискин Жена Ивана Юлия Мельникова Капитан полиции Сапожников Сергей Серов Администратор гостиницы Светлана Левичева Портер Нина Маслова Полицейский Олег Поротиков Сотрудник милиции Алексей Васиев Директор фирмы Владимир Питеров Сержант полиции Виталий Сорочан Конвой Вячеслав Апанасенко97 минут
На русском без субтитров
| DVD | |
|---|---|
| Код региона | Все |
| Соотношение сторон | 16: 9 |
| Языки | Без субтитров |
| Характеристики | Выбор главы |
| Источник | Диск Новый, Россия и ДВД.
Добавить комментарий |