А семья — это самое главное в жизни.

Ты семья. А семья — это навсегда.

А семья была всего лишь сопутствующим ущербом.

Мир будет двигаться дальше, а семья так и будет страдать в неизвестности.

Дом у меня там, а семья здесь.

Похоже я вмешался в семейный спор, а семья очень важна, особенно в это время года, тем более, что, насколько мне известно, ваш отец скончался.

Любимым фильмом отца был «Крёстный отец», а семья каждое Рождество смотрела по два фильма, как «Жить и умереть в Лос-Анджелесе».

Я ей сказала, что она ухаживает за своей бедной тетушкой, а семья — всегда важнее всего.

С тех пор не только их дом, но и весь квартал был взят под наблюдение, а семья постоянно подвергалась угрозам со стороны полиции.

Мы с тобой семья, Навид, а семья никогда не откажет.

Но они — моя семья,

В этом Гладиаторши похожи на семью, а семья — на первом месте.

«Сверхъестественное» — это сериал о семье, а семья зачастую является одновременно и вашей силой, и вашей слабостью.

Это означает, что при доходе взрослых членов семьи до 1907 долл. в месяц (чистыми) инвалид может, тем не менее, получать 1 долл. по линии ГДЛТИ, а семья получает полное пособие на медицинские нужды.

А семья значит никогда…

А семья это семья.

А семья переехала в Париж.

«Семья – это муж, жена и дети, а все остальные – родственники»

К сожалению, в мире очень много неполных семей и разводов. Изучение причин в течении 14 лет привело к тому, что ответы стали повторяться, и выявились основные:

  Часто, как ни банально, люди разводятся от того, что не хватает характера преодолевать препятствия, чтобы строить семью: тут и быт, и финансы, и различия воспитания, … но это же не причины, это можно решить. Защитить свою семью, а значит и своих детей, от этих трудностей можно.

  Про истории семей, которые добившись чего-то в жизни, узнали, что у них, оказывается, так много близких родственников, думаю все знают. Каждый получает в жизни то, чего добивается.

  А вот люди, создавшие браки по ошибке/глупости, очень часто расставшись сохраняют хорошие отношения. 

  Самой печальной и шокирующей причиной разводов оказались … родственники. Ведь семья – это муж, жена и дети, а все остальные – родственники. Как медленно и незаметно рушатся отношения «благодаря» периодическому вмешательству в жизнь семьи. 

Оказывается об этом было давно известно: 
«В Библии сказано — да отлепится муж от матери и прилепится к своей жене. Если муж продолжает решать проблемы родственников, то он грешит против своей жены. Грех не в проведении времени с родственниками, а в возникновении конфликта в семье. На первом месте должно быть единомыслие мужа и жены. Если он к этому стремится — он проблему решает. Если не стремится, то он ставит под сомнение отношения в семье.»

https://eparhia-saratov.ru/Articles/rodnee-muzha-i-zheny-ne-dolzhno-byt-nikogo

  Также всем знакома взаимопомощь и взаимовыручка, но … много историй когда родственники «дарят» чувство вины. Например, когда у кого-то из родственников жизнь не задалась, и им «должны» помогать, иначе чувство вины обеспечено (тут что ни говорите, а поступки решают). Счастье и благополучие родственников тут стоит на первом месте. Но нужно помнить, что у всех жизнь одна.

«Не может быть таких обстоятельств, при которых человек имел бы право посягать на свободу себе подобных»
Жюль Верн

  Интересный факт, что для всех этих конфликтов даже расстояние не играет роли, это не мешает звонить.

Владимир Пархоменко: 
«— Я более того скажу, мы, когда людей венчаем, всегда их предупреждаем, что в семейных отношениях есть такой закон: как только вы стали мужем и женой, вы никому не должны ничего вообще рассказывать о ваших семейных отношениях. Вот спрашивает мама: ну как там чего? «Все хорошо мама, все прекрасно….» 
— Но мама же так просто не сдастся. Ей же интересно, она дальше начнет расспрашивать. 
— А вы дальше продолжайте ее бдительность усыплять — «все хорошо мама, не волнуйся….» Блокировать надо это все. Нельзя позволять даже под благовидным предлогом влезать в ваши отношения – это закон. Если ваши родители, а также многочисленные родственники на первой стадии к этому привыкнут, потом они вообще перестанут вас беспокоить.» 

 Счастья вашим семьям!!!

«ГУ — это семья, а в семье всем… — Гуманитарный университет

«ГУ — это семья, а в семье всем помогают»

В прошлый четверг наши журналисты получили дипломы: маски и социальное дистанцирование не смогли испортить трогательную встречу. Ксения Баранец рассказала о своём обучении в ГУ, о внеучебных мероприятиях и дальнейших планах.

В ГУ я попала случайно — сбежала с филфака

После первой встречи абитуриентов на филологическом факультете УрГПУ поняла, что не смогу там учиться. Рыдала дома и «шерстила» интернет, потому что очень хотелось поступить именно в год своего выпуска. Случайно наткнулась на рекламу ГУ и решила, что нужно попробовать все варианты. Можно сказать, прыгнула в последний вагон и вообще не пожалела.

Изначально я хотела поступать на направление «Реклама и связи с общественностью», но там изменились экзамены. А с журналистикой я начала «дружить» ещё в школе, вот и подумала, почему бы не подать документы на это направление. Тем более, у меня был ряд публикаций.

Самой большой моей сложностью было время. Время, которое постоянно ускользало

На ТРЖ в первый год обучения было огромное количество теоретических предметов, которые мне приходилось просто зубрить. А поскольку я жила на другом конце города, то уже в дороге начинала делать домашние задания, потому что я вообще не успевала делать его дома. Сложными предметами для меня были те, где я не находила «коннект» с преподавателем.

Из-за того, что жила далеко, было тяжело учиться, но ко всему привыкаешь. На самом деле, я благодарна преподавателям, которым не трудно было объяснить для нас тему в миллионный раз. Помогали в учёбе и девочки из группы: мы старались всё делать вместе и помогать друг другу с любыми вопросами и трудностями.

О конкурсах «Мисс и мистер Гуманитарный университет» и «Академке»

За все 4 года обучения я активно участвовала во внеучебной деятельности. Но самым запоминающимся мероприятием для меня стал конкурс «Мисс и мистер ГУ». На нём я ощутила себя полноценным организатором. Это так прекрасно: придумывать проекты для любимого ГУ, реализовывать их и находить новые таланты. А в качестве участника мероприятий отмечу, конечно же, конкурс на лучшую академическую группу. От конкурса я получила невероятный драйв и огромное количество эмоций! Совсем не важно, что победитель только один. Болеют абсолютно за всех.

О педагогах

Моим любимым преподавателем стала Евгения Фадичева, которая преподаёт основы рекламы и пиара. Она открыла мне новый мир смежной профессии. Так легко и интересно мне не давался ни один предмет. А вообще, очень люблю Светлану Олеговну Калганову («Современный русский язык», «Стилистика и литературное редактирование», «Аналитическая письменная речь») и Ирину Геннадьевну Сибирякову («Риторика», «Культура речи») за их подход к процессу обучения. За невыполненные «домашки» нас не ругали и не отчитывали, а очень корректно и с юмором стыдили.

Когда я пришла в ГУ, была только одна мысль — просто учиться

И не создавать себе проблем, которые будут отвлекать от учёбы. Но! Спасибо всем мероприятиям в ГУ, спасибо организаторам и преподавателям, что у нас есть такой «движ». Я более чем удовлетворена своей жизнью в университете.

Благодаря лекциям Жени Фадичевой я хочу найти себя в ивентах, пиаре. Если не получится, я точно смогу реализоваться в сфере журналистики, потому что столько проектов было за 4 года, я столькому научилась и реально прокачала себя.

Мой совет первокурсникам: ребята, кайфуйте, соглашаетесь на любые проекты, даже самые провальные и не очень интересные, так вы научитесь отсеивать и сформируете свою профессиональную точку зрения. Участвуйте в мероприятиях ГУ, они подарят вам много друзей. ГУ — это семья, а в семье всем помогают. А семья ТРЖ ещё крепче, здесь можно найти поддержку не только у преподавателей, но и выпускников, даже если вы с ними не знакомы.

Текст: Александра Игошева

Самойлова А. Семья и духовность. Зачем семье нужна духовность?

Студентам

Самойлова А. Семья и духовность. Зачем семье нужна духовность?

Семья и духовность. Зачем семье нужна духовность?

Я начнусвое рассуждение с легкого разминочного упражнения. Называется оно «Ассоциации». Итак, все, что для этого нужно, — услышать задание и постараться ответить на поставленные вопросы.

-Если семья – это страна, то она называется

-Если семья – это фрукт, то это…

-Если семья – это известный литературный. персонаж, то это….

-Если семья – это животное, то это….

 В ходе этого упражнения мы с вами увидели, что у каждого свои ассоциации связанные с таким понятием как Семья! У каждого свое видение и свое представление о семье. Это говорит о том, что все мы разные и уникальные в своих ассоциациях и восприятии. И это здорово и вполне естественно.

Итак, что же такое семья?

Как говорят словари, «семья – это малая социальная группа, основанная на браке, кровном родстве или усыновлении и связанная общностью быта, отношениями взаимопомощи и взаимной ответственностью». Подчеркну, что семья связанна (я имею в виду здоровую семью, со здоровыми отношениями) не только (и не столько) общностью быта, сколько отношениями взаимопомощи и взаимной ответственностью. А это, в свою очередь, должно базироваться на взаимоуважении, взаимопринятии и взаимной любви.

Итак семья! Семья – это союз двух свободных, самодостаточных личностей. Семья – это живой организм, который постоянно претерпевает изменения Семья – это микромодель или даже аналог государства. Семья – это система. Семья – это образ жизни!….

Семья – это «яблоки в корзине». Они находятся все в одном месте (объединены корзиной), но при этом каждое остается самостоятельным яблоком (как и любой член семьи всегда остается самостоятельной личностью). Итак, чтобы сделать совместную жизнь возможной, эти два набора ценностей (два спелых яблока) со временем надо привести в соответствие.Каждый должен научиться: слушать, слышать, доверять, уступать, видеть и уважать в партнере самостоятельную личность. При этом возможна небольшая частичная потеря самоиндивидуальности, но зато приобретается чувство принадлежности  к семье, к системе,к Союзу.

Семья – это живая система, которая постоянно претерпевает изменения. И значит никогда не поздно эти и многие другие вопросы проговорить, обсудить и передоговориться!

Функция семьи:

Репродуктивная функция является основной функцией семьи, а воспитание является основной целью родителей.   Воспитать хорошего человека можно в духовной семье, гдедети прежде всего ориентированы на духовные, семейные ценности, а не на материальные.

Нам всем надо помнить правило: «В браке мы учимся друг у друга и приспосабливаемся друг к другу. И это происходит на протяжении всей жизни».

Дисфункциональные семьи – это семьи, в которых выполнение функций нарушено, в силу чего в супружеской, родительской, материально-бытовой и других сферах жизнедеятельности не достигаются цели членов семьи и общества в целом

Причины возникновения семейной дисфункции могут быть разнообразные, это:

-особенности личности членов семьи и взаимоотношений между ними, определенные условия жизни

-отсутствие соответствующих знаний, умений, а главное желаний и стремлений к гармонизации взаимоотношений.

Гармония в семье — это постоянный осознанный труд.

Хочу заметить, что для российской семьи характерна определеннаяособенность, которая может выступать как причиной дисфункции семьи.

-Молодые люди все реже стремятся к созданию семьи

Этому способствовало:

— разрушение прежней идеологии и отсутствие новой, которая бы позволила личности обрести чувство принадлежности, защищенности, выстроить и реализовать морально-нравственные ценности

— в обществе возросла потребность в иллюзиях и чудесах,с  одной стороны это обусловлено стремлением к поверхностным, ни к чему не обязывающим контактам, – с другой,именно это и является отсутствием духовности в семье,это говорит о том,что им не прививали семейные духовные ценности.

Что же такое духовность семьи?

Духовность семьи – это довольно философский вопрос и в наш век деградации он не всем понятен.

Духовность – проявление в человеке качеств, которые никак не связаны с нашим миром. Эти качества дают человеку возможность внутреннего роста с целью обретения им силы творца.

Поэтому, для начала, необходимо выяснить,а что такое духовность семьи? И только после этого можно понять, для чего она нужна.

Духовность семьи – это когда как у мужа так и у жены есть духовные и материальные ценности.

« А действительно, зачем вообще нужна духовность семьи?» На самом деле, еще не так давно я и сама до конца не осознавала что такое вообще духовность, а тем более не знала, как ее можно применить в жизни, а тем более в семейной жизни.

Дело в том, что наша культура устроена таким образом, что нам сейчас постоянно навязывают материальные ценности и дают понять, что чем больше у тебя будет дом, чем разнообразней и дороже твоя одежда – тогда ты успешен и счастлив в жизни.

Но, как показывает жизнь – это далеко не так, потому что вся суть кроется не в накоплении материальных благ. Я не хочу сказать, что нам необходимо выбросить все свои вещи, продать квартиру, машину, мебель, и пойти в монастырь на вечную молитву и поклоны.

Здесь суть абсолютно другая. Конечно же, так как мы живем в этом материальном мире – нам необходимо жилье, в котором нам будет комфортно, средство передвижения, хорошая и теплая одежда и прочие вещи. Но главное разделить духовные и материальные ценности. И если духовные ценности стоят на первом месте,вы скоро заметите,что проблемы развития семьи начнут испаряться сами собой, и если хотя бы половина нашего общества начнет понимать.,что такое духовность семьи и следоватьвышесказанному служению – наше общество и мир станут лучше!!!

Счастливая семья –  это духовная семья

«Путь к счастью начинается с желания блага и любви для своих близких людей, даже, несмотря на то, что они имеют недостатки и несовершенства»

подросток топором зарубил свою семью, а затем покончил с собой. Новости. Первый канал

Подробности шокирующей истории в Ульяновской области. Массовое убийство в селе Патрикеево — шестеро погибших, в том числе 16-летний подросток. Именно он зарубил топором пять человек — всю свою семью, а потом покончил с собой. Оставил предсмертную записку, в которой попытался все объяснить, но вопросы остались. Соседи и друзья в произошедшее поверить не могут: отличник, призер олимпиад, строил планы на будущее.

Спокойный, доброжелательный, общительный, победитель школьных олимпиад — это все о подростке, который, по версии Следственного комитета, убил свою мать, бабушку с дедом и малолетних брата с сестрой. После этого он отравил ближайшему другу голосовое сообщение, в котором рассказал, что убил семью и что теперь собирается покончить с собой. Поверить в это было невозможно.

«Я пошел, думал, может по самочувствию чего у него. И пошел я к нему. Стучусь в дверь — никто не открывает, я пошел к вышке и увидел тело. Я подошел, пощупал, он холодный уже был», — рассказывает Даниил, друг погибшего.

Оказывается, желание расстаться с жизнью зрело у подростка давно, но об этом не догадывались ни родные, ни друзья. Поводом, якобы, стал конфликт с матерью и ревность к брату и сестре. Обо всем этом говорилось в предсмертной записке.

«Никто никогда не думал, что он так сделает. Парень такой спокойный», — отмечает родственница погибших Наталья Ширманова.

Отсутствие явных видимых причин для такого поступка ошеломило близких и знакомых. Быть рядом и даже не догадываться, какая тьма в голове у мальчика. Об этом сейчас думают все, кто с ним общался.

«У него нормальное настроение, позитивное, не было такого, чтобы злился на кого-то, бил кого-то — не было такого вообще. Он со всеми, с друзьями, с нами и с другими, в школе, он общался хорошо, даже шел на отличника», — говорит друг погибшего Даниил.

Да, были семейные проблемы — мать развелась с отцом, когда тот начал пить. Вышла замуж еще раз. По нынешним меркам обычная семья и обычный подросток, если не считать фанатичного увлечения компьютерными играми в сети. Хотя кого этим сейчас удивишь?

«Постоянно сидел за компьютером, бабушка его говорит — в три часа ложиться, а иногда и в пять ложился, а тут уже надо бежать на учебу, с наркотиками он замечен не был, пить он не пил, нормальный парень, не знаю, что его побудило», — говорит родственница погибших Наталья Ширманова.

Родной отец мальчика тоже вспоминает про компьютер, в последний раз он виделся с сыном в конце мая — перед выпускным.

«Я ему давал денежку, бабушка тайком ему давала и при мне давала. Он, по словам его покойной матери, все вот на эти „стрелялки“ переводил», — считает отец погибшего.

В Следственном комитете не исключают, что у мальчика могла быть шизофрения, уже назначена посмертная психологическая экспертиза, в основу которой почерк, сочинения, записи в соцсетях, история просмотров страниц в Интернете. Увлечение компьютерными стрелялками тоже принимается во внимание.

«У детей и подростков формируется натуральная зависимость от компьютерных игр, которую можно сравнить с алкоголизмом и наркоманией. Игры агрессивного содержания или игры, которым подростки уделяют много времени. Это может служить как фактор», — считает врач-психиатр Илья Смирнов.

Конечно, выводы делать еще рано, но психологи говорят о доказанном повышенном уровне агрессии у детей, которые играют в компьютерные стрелялки. Если часами вживаться в роль убийцы, то иногда этом может привести к тому, что ребенок перестает различать сюжет игры и реальную жизнь.

«А ты налей и отойди»: история бренда «Моя семья»

 А реклама бренда стала настоящим сериалом, за которым следят уже два десятка лет. Рассказываем, как появилась «Моя Семья» и при чем здесь семейное ток-шоу из середины девяностых.

История бренда «Моя Cемья» началась в 1996 году, когда на канале ОРТ (сегодня это Первый канал) вышло популярное семейное ток-шоу «Моя Cемья» с Валерием Комиссаровым. Студия шоу была стилизована под большую кухню, где гости обсуждали разные семейные проблемы.
В том же 1996-м компания «Петросоюз», созданная в 1989 году как импортер продуктов, решила выпускать собственную продукцию. Для этого «Петросоюз» купил у Комиссарова право на производство товаров под маркой «Моя Cемья». Под этой маркой стали выпускать кетчуп, а затем и другие продукты — но не соки.

К концу 1990-х продукты «Моя Cемья» стали известны по всей России. В 2000 году на бренд «Моя Семья» обратила внимание молодая новосибирская компания «Нидан», планирующая начать завоевание российского рынка. На тот момент она производила соки под собственной маркой, но в компании полагали, что для выхода на новый уровень нужен новый яркий бренд. «Моя Семья» подходила идеально, поэтому руководство обратилось к Валерию Комиссарову с предложением переуступки названия для использования его в производстве соков. Тот согласился, и уже в 2001 году сок «Моя Семья» появился в магазинах.

В продвижении соков «Моя Семья» была сделана ставка на забавную, подчеркнуто «народную» рекламу. Так появились знаменитые ролики с юной актрисой Дианой Шпак и Александром Половцевым из сериала «Улицы разбитых фонарей». Успех роликов «Пиджак», «Налей и отойди» и других был феноменален, их диалоги стали источником многих крылатых фраз.

Образ показанной в роликах семьи — немолодого отца, его полной спокойствия жены, хулиганки-дочери и старшего сына — оказался близок публике. Реклама «Моей Семьи» стала чем-то вроде сериала — всего было снято около 30 сюжетов, из которых в телевизионный эфир попали 23. В 2010 году эти ролики, по итогам голосования среди экспертов-маркетологов на портале Sostav.ru, заняли второе место в рейтинге лучших российских рекламных кампаний за последние 20 лет.

В 2010 году ОАО «Нидан Соки» вошло в четверку лидирующих производителей соков в России с долей рынка 13% (сегодня этот показатель составляет 17%). В этом же году о его покупке за $276 млн объявила компания Coca-Cola.

К тому моменту рынок соков в России находился на спаде, а линейка «Моя Семья» включала 10 видов нектаров и три морса. Уже в конце 2010 года «Нидан» провел исследования вкусовых предпочтений россиян и по его результатам улучшил рецептуру почти всей линейки нектаров — новые формулы для этого были взяты из рецептурной базы Coca-Cola. Но новые вкусы требовали и новой упаковки. Здесь также были использованы наработки Coca-Cola, в частности, элементы дизайна популярных соков Minute Maid.

Наконец, бренду надо было сообщить об обновлении потребителям. И тут в компании пошли на болезненный, но необходимый шаг — перезапуск рекламного сериала. Так на замену семье подросшей Дианы Шпак пришли новые герои: папа Дмитрий Брекоткин (команда КВН «Уральские пельмени»), беременная мама, маленький сын и дочь. Первым роликом в новой серии стала пересъемка знаменитого «Налей и отойди» — дань любимому рекламному сериалу.

Весной 2014 года было принято решение о перенесении бренда «Моя Семья» в портфель компании «Мултон», входящей в состав системы Coca-Cola Россия. А осенью того же года стартовала новая рекламная кампания с обновленным актерским составом — обаятельной девочкой Ксюшей и корги Гошей.

К октябрю 2015 года по результатам онлайн-трекинга Ipsos торговая марка «Моя Семья» была известна 94% населения России и заняла позицию бренда номер один, ассоциирующегося с семейными ценностями. По данным Nielsen, бренд вошел втоп-4 ключевых брендов соков на рынке.
В 2017 году «Моя Семья» пополнилась вкусом «Цитрусовый микс», а в рекламе бренда появилась новая звезда — участница детского шоу талантов «Лучше всех» Ева Смирнова. Кстати, к ней присоединился и корги Гоша — «смесь сардельки с табуреткой».

Последний на сегодняшний день перезапуск марки случился в 2018 году. В августе на полках супермаркетов появилась обновленная «Моя Семья» с девятью новыми вкусами в обновленной яркой упаковке. Это были новые интересные миксы из фруктов, ягод и овощей (некоторых из них еще не было на рынке), и все они получили забавные фантазийные названия: Ягода-Вкуснягода, Клубничина-Земляничина, Абрикос-Персикос, Цитрус-Хитрус, Томато-Сельдерято и другие.

А рассказал о новых вкусах в рекламе еще один участник «Уральских пельменей» (и новый папа в рекламном сериале) — Сергей Ершов. Кстати, за этот перезапуск компания получила престижную награду Effie Awards 2019.

Подробно прочитать, как компания «Мултон» производит соки на заводе в Подмосковье, можно здесь.

Центр планирования семьи – ГКБ имени А.К. Ерамишанцева

Работа ЦПС в составе многопрофильной больницы позволяет решить практически любую диагностическую и лечебную задачу. При необходимости госпитализация осуществляется сразу из наших кабинетов. Мы находимся в шаговой доступности от метро, у нас есть удобная автостоянка. С помощью специалистов ЦПС пациенты получают ответы на вопросы о планировании семьи, рождении желанных детей, сохранении репродуктивного здоровья.

ЦПС представлен самыми опытными и квалифицированными специалистами.  Врачи первой и высшей квалификационных категорий, кандидаты медицинских наук —   специалисты по лечению бесплодия, невынашивания беременности, эндокринной гинекологии осуществляют диагностику и лечение практически всех видов гинекологической и акушерской патологии. Наши акушерки имеют многолетний опыт работы с беременными женщинами и гинекологическими пациентками.

Прием пациентов осуществляется по направлению из женских консультаций или поликлиник, либо по желанию пациентки.

Медицинские услуги в ЦПС оказываются по полису ОМС. Медицинские услуги, не входящие в Территориальную программу государственных гарантий оказания бесплатной медицинской помощи, могут быть оказаны в ЦПС на платной основе.

При себе необходимо иметь паспорт, страховой полис ОМС, выписку из амбулаторной карты (форма 027/у) или результаты обследования.

Запись на прием по ОМС осуществляется по телефонам:

Call-центр +7 (499) 940-04-30

Регистратура на Октябрьской: (499) 686-10-23

Мы работаем ежедневно с 8.00 до 20.00 часов. Суббота – с 9.00 до 14.00 часов. Воскресенье – выходной.

Наш адрес:

129344, г. Москва,  ул. Октябрьская, д. 69. Проезд: м. «Марьина Роща», 4 выход

1. Что мы лечим, какие методы используются

АКУШЕРСТВО

• Ведение беременности, в том числе повышенного риска – у пациенток в различными экстрагенитальными заболеваниями и отягощенным акушерско-гинекологическим анамнезом
• Угроза прерывания беременности
• Ранний токсикоз
• Преэклампсия
• Холестатический гепатоз беременных
• Плацентарная недостаточность
• Пренатальный скрининг в I, II и III триместрах
• Лечение сопутствующих заболеваний
• Кардиотокография плода

 ГИНЕКОЛОГИЯ

• Инфекции, передающиеся половым путем
• Вагинальный дисбактериоз
• Кандидоз (молочница)
• Хронические тазовые боли
• Хронический эндометрит
• Хронический аднексит
• Опущения тазовых органов
• Стрессовое недержание мочи
• Отбор пациенток на оперативное лечение
• Эрозия (эктопия), дисплазия, эктропион шейки матки
• Кольпоскопия, видеокольпоскопия
• Радиоволновая биопсия и лечение с использованием прибора «Сургитрон»
• Медикаментозное прерывание нежелательной беременности
• Эстетическая урогинекология: контурная пластика половых губ, омоложение половых органов, устранение синдрома «широкого влагалища», увеличение зоны G, коррекция области эрогенных зон с использованием гимнастики для интимных мышц, введения объемобразующих средств на основе гиалуроновой кислоты

КАБИНЕТ ЭНДОКРИННОЙ ГИНЕКОЛОГИИ

• Лечение различных гормональных нарушений, как врожденных (генетических), так и приобретенных – первичная и вторичная аменорея, синдром Шерешевского-Тернера, дисгенезия гонад и др.
• Индивидуальный подбор контрацепции, в том числе в послеродовом периоде
• Введение и удаление внутриматочных спиралей
• Введение внутриматочной гормональной системы «Мирена»
• Введение контрацептива «Импланон»
• Нарушения менструального цикла
• Проблемы климактерического периода
• Эндометриоз
• Консервативное лечение миомы матки

КАБИНЕТ ЛЕЧЕНИЯ БЕСПЛОДИЯ

• Трубно-перитонеальный фактор бесплодия
• Эндокринный фактор бесплодия
• Сочетанные формы бесплодия
• Проведение стимуляции овуляции
• Подготовка к ЭКО, в том числе направление на оперативное лечение в отделение гинекологии
• Ведение реестра ЭКО

КАБИНЕТ ПРОФИЛАКТИКИ И ЛЕЧЕНИЯ НЕВЫНАШИВАНИЯ БЕРЕМЕННОСТИ

• Потеря беременности в анамнезе
• Привычное невынашивание
• Антенатальная гибель плода в любом сроке в анамнезе
• Гормональные, иммунные и аутоиммунные нарушения
• Нарушения в системе гемостаза
• Истмико-цервикальная недостаточность
• Прегравидарная подготовка (подготовка к беременности) и ведение беременности у вышеописанных пациенток

КАБИНЕТ УЛЬТРАЗВУКОВОЙ ДИАГНОСТИКИ

• Ультразвуковая диагностика в акушерстве и гинекологии
• Скрининговые исследования во время беременности
• УЗИ щитовидной и молочных желез
• Цервикометрия
• Фолликулометрия
• УЗИ почек и мочевого пузыря
• Допплерометрия маточно-плацентарного кровотока.

ПРОЦЕДУРНЫЙ КАБИНЕТ

• Забор анализов
• Внутримышечные и внутривенные инъекции

2. Как попасть в наше отделение или к конкретному доктору (по рекомендации или по отзывам)

Бесплатные консультации осуществляются при наличии:

• Паспорта
• Полиса ОМС
• Направления от лечащего врача из женской консультации или поликлиники (форма 057/у) — желательно
• Выписки из амбулаторной карты (или результатов анализов)

Платные медицинские услуги

• Низкие цены
• Возможность выбора лечащего врача
• Никаких дополнительных или скрытых расходов
• Возможность оплаты пластиковой картой
• Полная анонимность

За 25 лет «Семья: воззвание к миру» перешло из ООН в Ватикан и за его пределы.

Завершая Общее собрание Общества милосердия 23 сентября 1995 г., Президент Гордон Б. Хинкли посмотрел в глаза женщинам, молодым и старым, замужним и одиноким, с детьми и без детей — «некоторым из которых так тяжело бремя» — и поблагодарил им за их решимость поступать правильно.

В мире суматохи, обмана и изменения ценностей «мы чувствовали, что должны предупреждать и предупреждать», — сказал он.

Покойный 15-й Президент Церкви Иисуса Христа Святых последних дней приступил к представлению провозглашения, провозглашающего и подтверждающего стандарты, доктрины и практики Церкви в отношении семьи: «Семья: Воззвание к миру», изданное Первое Президентство и Совет Двенадцати Апостолов.

Прочитав вслух воззвание, Президент Хинкли решительно заявил: «Мы рекомендуем всем внимательно, вдумчиво и с молитвой прочитать это воззвание.Сила любого народа коренится в стенах его дома. Мы призываем наших людей во всем мире укреплять свои семьи в соответствии с этими проверенными веками ценностями ».

В воззвании о семье сформулировано божественное предназначение семьи в плане счастья. Из него ясно видно, что брак между мужчиной и женщиной установлен Богом и что все люди являются возлюбленными духовными сыновьями или дочерьми Небесных Родителей. Он учит священным обязанностям супругов и родителей, а также принципам успешного брака и семейной жизни.

С тех пор, как 25 лет назад Президент Хинкли издал семейное воззвание, на его учение часто ссылаются руководители Церкви на встречах со Святыми последних дней и в межконфессиональных отношениях. Его принципы сформировали исследования и учебную программу по вопросам семьи в Университете Бригама Янга. Прокламация висит на стене в домах бесчисленного количества членов Церкви и распространяется миссионерами по всему миру.

В 10-ю годовщину провозглашения на октябрьской Генеральной конференции 2005 г. старейшина М.Рассел Баллард, член Кворума Двенадцати Апостолов, сказал, что «пророческий документ» опередил свое время в защите традиционных семейных ценностей. Его ясный и простой язык контрастирует с путаницей общества и запутанным определением семьи.

«Это было тогда и сейчас является призывом к защите и укреплению семей и суровым предупреждением в мире, где упадок ценностей и неверно расставленные приоритеты угрожают разрушить общество, подрывая его основную единицу», — сказал Апостол, который сейчас является членом кворума. Действующий президент.

С момента основания Церкви в 1830 году руководители Церкви выпустили только шесть воззваний, две из которых самыми последними — это семейное воззвание и «Восстановление полноты Евангелия Иисуса Христа: двухсотлетнее воззвание к миру». Президент Рассел М. Нельсон во время апрельской Генеральной конференции 2020 года.

Другие включают в себя воззвание 1841 года, в котором подробно описывается прогресс Церкви; провозглашение 1845 г. о Восстановлении Евангелия; провозглашение природы Бога 1865 года; и провозглашение в 1980 году 150-летия организации Церкви.Первые три воззвания были изданы в первые 35 лет после организации Церкви, а последние три — за последние 40 лет.

Прокламации отличаются от официальных заявлений, доктринальных изложений или заявлений о политике. Прокламации, как правило, обращены не к Святым последних дней, а к миру.

«Семья: воззвание к миру» более 150 раз цитировалось на генеральных конференциях и использовалось в межконфессиональных дискуссиях в Ватикане и на других международных площадках за последние 25 лет. годы.

На Всемирном конгрессе семей, состоявшемся в Амстердаме, Нидерланды, в августе 2009 года, президент Нельсон — тогда член Кворума Двенадцати Апостолов — процитировал отрывки из воззвания, чтобы подчеркнуть важность семьи как фундаментальной ячейки общества. .

«Семья подвергается нападениям со всех сторон», — сказал он. «Многие задаются вопросом, неужели заведение больше не нужно. Наш ответ определен. Если и есть надежда на будущее народов, то эта надежда находится в семье.Наши дети — наше богатство; наши дети — наша сила; наши дети действительно наше будущее! »

Обращаясь к религиозным лидерам в Ватикане в ноябре 2014 года, президент Генри Б. Айринг, член Первого Президентства, призвал к «возрождению счастливых браков и продуктивных семей» на основе принципов провозглашения семьи.

«По мере того, как мы работаем над построением и поощрением верных, любящих браков, в которых мужчины и женщины становятся единым целым и лелеют свои семьи, Господь умножит наши усилия», — сказал он.«Когда мы объединимся в этой работе, я обещаю прогресс в достижении этого счастливого результата».

Выступая в ходе религиозной групповой дискуссии об интеграции беженцев в Организации Объединенных Наций в Нью-Йорке в апреле 2017 года, Генеральный президент Общества милосердия Жан Б.Бингем выразила надежду, что религиозные организации «все будут работать вместе маленькими и простыми средствами для достижения выдающихся целей».

«По определению моей веры и Организации Объединенных Наций семья является основной ячейкой общества», — сказала она, опираясь на прокламацию о семье. «Таким образом, следует позаботиться о защите семьи, особенно тех, кто находится в ужасных обстоятельствах».

Старейшина Джеффри Р. Холланд, член Кворума Двенадцати Апостолов, подчеркнул, что семья является краеугольным камнем общества, когда он выступал перед членами Сената и Палаты депутатов в Аргентине в мае 2018 года.

«Друзья мои, семья имеет значение», — сказал он, представив прокламацию о семье. «Действительно, ценности и сильные стороны нации — это всего лишь сумма ценностей и сильных сторон ее семей».

Алан Хокинс, директор Школы семейной жизни BYU, сказал, что школа чувствует особую ответственность перед учащимися и церковью, чтобы помочь провозглашению семьи «ожить в душах людей и в их жизни». сердца. »

Когда старейшина Меррил Дж.Бейтман начал свое пребывание на посту президента BYU в январе 1996 года, он попросил преподавателей изучить способы поддержки и продвижения провозглашения семьи и ее принципов. Хокинс, проработавший в УБЯ 30 лет, в то время был преподавателем.

Одним из наиболее заметных последствий реакции УБЯ на провозглашение через поддержку старейшины Бейтмана было создание Школы семейной жизни, реорганизованной из Департамента семейных наук, сказал Хокинс.

«Когда старейшина (Бойд К.) Пакер посвятил Школу семейной жизни в 1998 году, он дал нам прямое поручение, и это заключалось в том, чтобы сделать провозглашение семьи нашим уставным документом », — сказал Хокинс.

«Мы относимся к этому серьезно, даже сейчас, 25 лет спустя. Это включено в нашу учебную программу. Мы регулярно говорим об этом во время обучения. И я думаю, как исследователи, мы чувствуем, что прокламация о семье дала нам руководство по важным вещам, на которых нужно сосредоточиться ».

Центр семейных исследований BYU, который существовал уже несколько десятилетий, был переориентирован, чтобы расширить миссию и обязанности Школы семейной жизни. Разработаны курс по провозглашению семьи и учебник. Сегодня учащиеся Школы семейной жизни обязаны проходить курс Вечной семьи, а другие учащиеся имеют возможность пройти курс религиозного образования.

«Можно подумать, что будет сложно потратить целый семестр на изучение 609 слов», — сказал Хокинс.«Но я обещаю вам, что это не так. Предстоит охватить так много сложных и глубоких тем ».

Как один из тех, кто преподавал в УБЯ до того, как была выпущена прокламация, и наблюдал ее влияние за последние 25 лет, Хокинс сказал: «Я думаю, что нет никаких сомнений в том, что прокламация о семье дала нам в Школе семейной жизни большее чувство миссия и цель ».

Определение семьи на Dictionary.com

1. основная социальная единица, состоящая из родителей и их детей, рассматриваемая как группа, независимо от того, живут они вместе или нет: традиционная семья.
2. социальная единица, состоящая из одного или нескольких взрослых вместе с детьми, о которых они заботятся: семья с одним родителем.

Дети одного человека или одной пары вместе: Мы хотим большую семью.

супруг и дети одного человека: на следующей неделе я беру семью в отпуск.

любая группа людей, тесно связанных кровью или браком, как родители, дети, дяди, тети и двоюродные братья: вступать в брак в социально значимой семье.

все эти люди считаются потомками одного общего предка: английской семьи Тюдоров.

В основном британцы. утвержденное происхождение, особенно благородное, титулованное, знаменитое или богатое происхождение: молодые люди из семьи.

группа людей, образующих домашнее хозяйство под одним главой, включая родителей, детей, слуг и т. Д.

штат или помощник должностного лица: президентская семья.

группа людей или вещей, связанных общими характеристиками, особенностями или свойствами: семья поэтов-романтиков; семейство галогенных элементов.

группа людей, которые, как правило, не являются кровными родственниками, но разделяют общие взгляды, интересы или цели и часто живут вместе: многие коммуны хиппи шестидесятых считали себя семьями.Я не общаюсь со своими родственниками, поэтому мои друзья — моя семья.

Группа людей, которых объединяет общее занятие или предприятие: наши волонтеры — важная часть нашей больничной семьи.

животное или животные с их детенышами: семья уток переходит дорогу.

группа продуктов или моделей продуктов, изготовленных одним производителем или производителем: семейство автомобилей Chevrolet.

Биология. обычное крупное подразделение отряда или подотряда в классификации растений, животных, грибов и т. д., обычно состоящий из нескольких родов.

Сленг. подразделение синдиката организованной преступности, особенно Mafia или Cosa Nostra, действующее в одном районе под руководством местного лидера.

1. Заданный класс решений одного и того же основного уравнения, отличающихся друг от друга только разными значениями, присвоенными константам в уравнении.
2. класс функций и т.п., определяемый выражением, содержащим параметр.
3. набор.

Семейство MicroRNA-34: потенциальный супрессор опухолей и терапевтический кандидат при раке | Journal of Experimental & Clinical Cancer Research

В планах Копенгагена стать первой в мире столицей с нулевым выбросом углерода.

КОПЕНГАГЕН — Утренний распорядок Луизы Пуруп Нор похож на что-то не из устойчивого будущего.

Когда она затаскивает детей в ванную, то, что смывается в унитаз, позже превращается в природный газ, который нагревает завтрак на плите. Яйца поступают от кур на заднем дворе. Бульканье кофемашины происходит от электричества, вырабатываемого ветром. Вода, которая моет посуду, нагревается за счет экологически чистых гранул из опилок. Рециркуляция направляется в восемь направлений, так что немногое остается на свалке. А добираться — сначала в школу, а потом на работу — на грузовом велосипеде, который пересекает обширную сеть велосипедных дорожек Копенгагена.

На фоне растущей глобальной озабоченности по поводу изменения климата Дания превратилась в шумный улей зеленых экспериментов, которые предпринимаются внутри домов, в городах и в национальном масштабе.

Такие домохозяйства, как Purup Nohr’s, стремятся ограничить свой углеродный след за счет сокращения потребления.

Копенгаген пытается стать первой столицей с нулевым выбросом углерода к 2025 году — целых 25 лет до того, как Вашингтон и другие крупные города мира ожидают, что у них будет шанс сократить свои выбросы.

Новоизбранные левоцентристские лидеры Дании пытаются превратить всю страну в демонстрацию того, как идти на экологию и не обанкротиться.

[Климатические решения: истории о людях и организациях, решающих экологические проблемы]

Датчане надеются, что они вдохновят других последовать их примеру, оказывая влияние, выходящее за пределы этой страны с населением 5,8 миллиона человек. Социальные усилия также являются показателем того, сколько нужно изменить, чтобы замедлить изменение климата.

Луиза Пуруп Нор кормит цыплят на своем заднем дворе в Копенгагене. (Ульф Свейн / The Washington Post)

Purup Nohr использует бывшие в употреблении тканевые подгузники, чтобы потреблять меньше. (Ульф Сване / The Washington Post)

Пуруп Нор и ее дочь Фрида сортируют мусор в своем доме. (Ульф Свейн / для The Washington Post)

TOP: Луиза Пуруп Нор кормит цыплят на своем заднем дворе в Копенгагене. (Ульф Свейн / для The Washington Post) ВНИЗ СЛЕВА: Purup Nohr использует подгузники из бывшей в употреблении ткани, чтобы потреблять меньше.(Ульф Свейн / для The Washington Post) ВНИЗ СПРАВА: Пуруп Нор и ее дочь Фрида сортируют мусор в своем доме. (Ульф Свейн / для The Washington Post)

Семья, стремящаяся «жить маленькими».

Для семьи Пурупа Нора забота об окружающей среде требует сознательных компромиссов.

«Мы не минималисты», — сказал 31-летний Пуруп Нор. Но она и ее муж изучили каждый аспект своей жизни на предмет воздействия на окружающую среду.

«Это путешествие», — сказала она.«Вы начинаете искать, потом смотрите на свою еду, а потом смотрите на свой транспорт. Когда вы начинаете думать об окружающей среде, вы хотите сделать свою жизнь подходящей ».

Некоторые из их корректировок были относительно незначительными. Они отказались от жидкого шампуня в пользу кусков мыла, для которых не нужны бутылки, и повесили песочные часы в душе, чтобы не валяться под водой. Они купили использованные многоразовые тканевые подгузники, которые они планируют перепродать кому-нибудь еще, когда они закончатся.Маленькая красная тележка, на которой гуляет их годовалый ребенок, подержана, как и остальные игрушки, чтобы не увеличивать производство и потребление.

Но семья также приняла более важные решения в отношении образа жизни с учетом климата и окружающей среды. Пуруп Нор, ее муж и двое маленьких детей не летают на самолетах — они посвятили себя изучению многочисленных островов Дании во время отпуска на долгие годы.Она работает неполный рабочий день, мотивируя это тем, что меньше зарабатывает, меньше тратит и меньше потребляет. И они довольствовались маленькой квартиркой в ​​городе, а не чем-то вроде более просторных загородных домов, в которых они выросли.

[ Европейское движение стыда бегства заставляет путешественников ездить на поездах, чтобы спасти планету ]

Семья не радикальна по датским стандартам. Например, они не исключили мясо из своего рациона, хотя сократили его.Время от времени они берут напрокат машины и стараются не доктрины в своих усилиях.

Датчане давно склоняются к экологически чистым действиям, особенно в Копенгагене, городе с 624 000 жителей и богатыми контркультурными традициями.

Согласно опросу Европейского Союза, почти половина датчан — 47 процентов — считают изменение климата самой серьезной проблемой, с которой сталкивается мир. Это более чем вдвое больше, чем у ЕС. в среднем 23 процента.

И все же исследователи из Норвежского университета науки и технологий оценили годовые выбросы углерода средним датчанином на уровне 14.5 тонн, выше ЕС. средний и отражающий богатство страны.

Многие ученые говорят, что для достижения целей Парижских климатических соглашений на 2050 год потребуется годовой лимит в две тонны на человека.

«Люди всегда говорят, что Дания так много делает, — сказала 16-летняя Матильда Валлат». «Мы все еще как адски загрязняем окружающую среду».

Валлат входит в число датских студентов, присоединившихся к движению «Пятницы ради будущего».Вдохновленные примером 16-летней Греты Тунберг, приехавшей из соседней Швеции, тысячи старшеклассников прошли маршем по мощеным улицам Копенгагена, осуждая поколение своих родителей за то, что они недостаточно делают.

[ «Мы заставим их услышать нас»: миллионы молодых людей во всем мире бастуют за действия ]

Сознательный выбор «жить по-маленькому», сказал Пуруп Нор, — это один из способов, которым люди могут быть добрее на планету, чем могли бы быть их родители.

Она и ее муж, по ее словам, «живут в мире, где наши родители живут в больших домах с большими деньгами, а мы — нет. У нас нет долгов. У нас нет сбережений. Это выбор. Мы также могли выбрать другую работу с большими деньгами. Я думаю, что мы живем хорошей жизнью ».

Она признала, что климатические проблемы могут показаться огромными.

«Я не читаю статей о таянии льда или кризисе биоразнообразия», — сказала она. «Мы никогда не говорим с детьми о климате.Я думаю, это слишком страшно.

Вместо этого она сосредотачивается на вещах, находящихся под ее контролем, одновременно спрашивая себя: «Вы хотите дать своим детям лучший мир или катастрофу?»

Становление первой столицей с нулевым выбросом углерода

Наличие мотивированного населения и семей, подобных Purup Nohr, позволило Копенгагену поставить одну из самых амбициозных целей в области климата.

Стремление стать углеродно-нейтральным в течение следующих шести лет направило градостроителей на разведку по всей Балтии в поисках экологически чистых опилок, превратили то, что когда-то было заторможенным движением, в миниатюрные заросли деревьев, и привело к строительству городского горнолыжного склона на вершине огромной новой электростанции, сжигающей мусор для производства электроэнергии.

«Жизнеспособность и экологическая трансформация идут рука об руку», — сказал мэр Копенгагена Франк Йенсен, который помог установить климатические цели вскоре после вступления в должность в 2010 году.

[Ученые взвешивают радикальные меры в отчаянной попытке спасти коралл]

Комбинированный горнолыжный склон и электростанция с изумрудно-зеленым искусственным покрытием, которое можно использовать круглый год, видны из исторического центра города 18-го века через гавань. Это визуальный центр усилий города по сокращению выбросов за счет перехода на более экологичные источники энергии.

Город также перешел с угля на гранулы из древесных опилок, оставшихся от лесозаготовок и производства пиломатериалов, чтобы нагреть воду, которая течет от центральных станций к домам — существующая ранее система под названием централизованное теплоснабжение, которая уже была более эффективной, чем домашние котлы.

«Это всего лишь небольшой город», — сказал Йорген Абильдгаард, руководитель группы, отвечающей за климатические планы Копенгагена. «Но это важно. Потому что, когда вы смотрите на глобальную перспективу, мы знаем, что люди переезжают в города. Мы знаем, что средний класс растет.Если эти инвестиции производятся устойчивым образом, это хорошо ».

[ Почему Грета Тунберг не получила Нобелевскую премию мира? ]

Еще одним важным направлением усилий города является то, как люди передвигаются. По оценкам властей Копенгагена, по крайней мере 75 процентов всех поездок должны выполняться пешком, на велосипеде или общественном транспорте для достижения целей на 2025 год.

Велосипед уже был популярен — часто это самый быстрый способ добраться из одного места в другое.Но городские планировщики продумали все, что они могут сделать, чтобы сделать езду на велосипеде еще более привлекательной, вплоть до установки подножек на светофорах, чтобы велосипедистам было легче переждать красный цвет.

Также соответствует целям Копенгагена по выбросам: в сентябре открылась линия метро с 17 новыми станциями, которые окружают центр города.

А чтобы уменьшить количество машин в центре города, Копенгаген поднял ежегодную плату за парковку для жителей с 1,48 до 148 долларов.

Дженсен, мэр, сказал, что зеленая реклама получила больше поддержки после ливня 2011 года, когда на Копенгаген выпало 6 дюймов дождя менее чем за три часа, вызвав масштабные наводнения и ущерб на сумму более 1 миллиарда долларов.

«Все жители Копенгагена могли видеть: мы должны действовать», — сказал Дженсен.

После наводнения градостроители и жители старались сделать городской ландшафт более впитывающим.

На одном участке улиц в Эстербро, густонаселенном районе недалеко от центра Копенгагена, парковочные места были отданы под участки земли, на которых растут деревья и кусты.Кольцевая развязка, которая когда-то была пустынной тротуаром, теперь превратилась в заросший березами парк. Машины по-прежнему проезжают, но по узким полосам. Птицы перелетают с дерева на дерево. Дети бегают по маленьким мостикам.

[ Как хиппи, фермеры и принц Чарльз сохраняют древнее искусство хеджирования ]

«Что-то произошло в Дании», — сказала Сара Йорн, руководящая Miljoepunkt Oesterbro, общественной организацией, которая помогла создать климатические планы местности.«Политики и лидеры сейчас слушают».

В общей сложности город планирует потратить около 400 миллионов долларов в течение 11-летних усилий, которые начались в 2013 году. Однако официальные лица подчеркивают, что экономический рост продолжается даже тогда, когда город инвестирует в экологию. И они говорят, что жители будут защищены от роста цен на ископаемое топливо, а также от некоторого ущерба от экстремальных погодных явлений в условиях потепления.

Абилдгаарду, директору проекта Копенгагена, было поручено внести изменения, не увеличивая расходы горожан, что ограничивало некоторые из его решений.Но он ожидает, что Копенгаген достигнет своей цели к 2025 году или очень близко подойдет к ней.

Он уже сократил свои выбросы на 40 процентов по сравнению с 2005 годом, когда его население увеличилось на четверть.

Но некоторые критики говорят, что этих усилий недостаточно. Помимо прочего, отсутствие выбросов углерода — результат тщательного набора расчетов, компенсаций и допущений — не то же самое, что отсутствие выбросов. Сжигание всех этих древесных гранул по-прежнему приводит к выбросу углекислого газа в атмосферу, даже если теоретически можно посадить где-нибудь новые деревья, чтобы повторно впитать его.

Некоторые предполагают, что Копенгаген жульничает, не включая свой международный аэропорт — официально находящийся за пределами города — в свои расчеты.

И, пожалуй, самая большая проблема, по мнению критиков: план города не требует больших жертв от граждан.

«Это не требует никаких изменений для физических лиц», — сказала Фанни Брохолм, член городского совета от левой партии «Альтернатива». «И нам нужно все изменить, если мы хотим достичь двух тонн» выбросов углерода на человека в год.

Брохольм сказал, что датчанам нужно меньше потреблять — это не учитывается в планах Копенгагена по выбросам, которые сосредоточены на том, что выходит из городских дымовых труб, а не на воздействии на окружающую среду покупки пластиковой игрушки из Китая при полете на пляжный отдых в Средиземное море. или есть красное мясо.

[Мои гамбургеры вредит планете?]

В сентябре группа Брохольма успешно продвинула план по сокращению мяса в блюдах, приготовленных муниципальными кухнями. Копенгагенским школьникам, городским служащим и пожилым людям, которые питаются в муниципальных центрах для престарелых, в обеденное время будет меньше мяса.

«Едим гамбургеры, фрикадельки и прочее — мы не должны этого делать», — сказал Брохольм.

Но Абильдгаард сказал, что города не обязательно имеют хорошие возможности для более широкого изменения такого индивидуального поведения.

«Вы должны спросить: какова роль города, когда речь идет о том, куда они едут в отпуск, что едят, какую одежду носят?» он сказал.

Построение низкоуглеродного общества

Копенгаген получил партнера для своих усилий по борьбе с изменением климата, когда в июне была избрана левоцентристская коалиция после кампании, в которой преобладали экологические вопросы.

Среди главных приоритетов нового правительства: сокращение национальных выбросов на 70 процентов к 2030 году по сравнению с уровнями 1990 года.

«Мы находимся на уровне 0,1 процента выбросов», — сказал министр охраны окружающей среды Дании Дэн Йоргенсен, чей выпущенный государством автомобиль представляет собой блестящий электрический седан Mercedes. «Это не спасет планету. Но мы хотим показать миру, что можем это сделать ».

Цель получила широкую общественную поддержку, и все крупные партии в Дании подписали ее, даже если Йоргенсен признает, что официальные лица еще не знают, как они могут ее достичь.Лидеры говорят, что они расскажут, как они доберутся до этого и как будут за это платить в ближайшие месяцы.

Существует обширный список рекомендаций для рассмотрения, подготовленный комиссией, созданной в 2015 году для консультирования датских лидеров по вопросам климатической политики. Возможные изменения включают уменьшение размеров молочного стада в Дании, посадку в сельской местности быстрорастущих ив для последующего сжигания для производства энергии и замену автомобилей с двигателями внутреннего сгорания на электрические.

Датские лидеры заявляют, что хотят продемонстрировать, что можно жить устойчиво без огромных новых обязательств по расходам или снижения уровня жизни.

По многим параметрам они уже движутся в правильном направлении. 15 сентября впервые ветряные турбины вырабатывали достаточно энергии для удовлетворения всех потребностей Дании в электроэнергии в течение полных 24 часов. Это стало важной вехой в усилиях страны по отказу от ископаемого топлива к 2050 году — обязательство, взятое на себя предыдущим левоцентристским правительством.

Датчане уже сталкиваются с высокими налогами, призванными стимулировать экологически чистый выбор: покупатели автомобилей платят 85-процентный налог с первых 27 500 долларов США при покупке любого автомобиля. Выше этой цены налог возрастает до 150 процентов. На самом деле это меньше, чем раньше, и новое датское руководство рассматривает возможность его повышения.

[ Революционная переработка? Новая технология превращает повседневный мусор в пластмассовое сокровище. ]

Зеленые усилия в других странах Западной Европы время от времени сбивали политиков с толку. Президент Франции Эммануэль Макрон спровоцировал месяцы протестов «желтых жилетов» во Франции, когда предложил повысить налог на газ для своей страны. Его критики заявили, что он не обращает внимания на экономические трудности сельского населения.

Датские лидеры, только что одержавшие победу на выборах, заявляют, что у них есть твердый мандат на то, чтобы быть зелеными. И они говорят, что относительно низкий уровень неравенства в Дании поможет оградить их от жалоб.

А пока, говорят, датчане посоветовали им быть амбициозными.

«Вместо того, чтобы спрашивать, что возможно, мы спрашиваем, что необходимо», — сказал Йоргенсен.

Сообщение Майкла Бирнбаума. Сюжет редактирует Мариса Беллак. Редактирование копии Тоддом Кистлером. Редактирование фотографий Карли Домб Садоф. Разработано Дж. К. Ридом и Карли Домб Садоф.

Новая налоговая льгота на детей может дать вашей семье бонусный чек каждый месяц в течение года.Что нужно знать

В 2021 году к тем, кому они понадобятся, могут поступить больше денег.

На этой неделе Конгресс уточняет детали выплаты 1 доллара президенту Джо Байдену.Предложение стимулов на сумму 9 триллионов и третий чек стимулов на сумму до 1400 долларов, который может прийти вместе с ним, в том числе для детей и взрослых иждивенцев. Как сообщает The Washington Post, демократы Палаты представителей также готовят закон, согласно которому миллионам американских семей будет выделено не менее 3000 долларов на ребенка в рамках плана, как обновление налогового кредита на детей. Это будет отдельно от предстоящей проверки стимулов и будет в дополнение к ней, если она будет принята и утверждена.

Хотя план Байдена и это возможное изменение детской налоговой льготы еще не закон, вы все равно можете получить больше денег обратно на свой возврат налога в рамках текущей версии кредита.На базовом уровне CTC — это кредит, на который родители могут претендовать, чтобы помочь уменьшить свои налоговые счета, в зависимости от количества и возраста их иждивенцев. Для многих это может стать столь необходимым источником компенсации в рамках возмещения за 2020 налоговый год.

Вот все, что вам нужно знать о CTC, включая требования к участникам для вас и ваших детей, его стоимость и планы Конгресса по его расширению.

Что такое детский налоговый кредит?

CTC — это кредит в размере 2000 долларов, который родители могут потребовать в счет уплаты налогов на каждого ребенка в возрасте до 17 лет (тот же возрастной диапазон для детей иждивенцев, когда речь идет о первом и втором стимулирующих проверках). И если этот кредит превышает сумму налогов, которую фактически должна семья, родители все равно могут получить до 1400 долларов США в качестве возмещения; технически это называется «Дополнительный налоговый кредит на ребенка» или возвращаемый CTC. Например, супружеская пара с детьми в возрасте 5, 10 и 12 лет получит общий налоговый кредит на ребенка в размере 6000 долларов — если им не нужно возмещение, и в этом случае они получат 4200 долларов.

Семьи с детьми старшего возраста также имеют право на участие: вы можете потребовать 500 долларов США за каждого ребенка в возрасте от 17 до 18 лет или студентов дневных отделений колледжа в возрасте от 19 до 24 лет.

Обратите внимание, что, хотя требования к участникам относительно широки, семьи с более высоким доходом могут получить уменьшенный кредит. Но супружеские пары, подающие совместно скорректированный валовой доход менее 400 000 долларов, имеют право на получение полной суммы, как и люди с AGI менее 200 000 долларов.

Как детская налоговая льгота связана с законопроектом Байдена о стимулах?

Американский план спасения Байдена (PDF) призвал законодателей расширять CTC. В предложении, которое демократы Палаты представителей планируют опубликовать, говорится, что семьи с детьми в возрасте 17 лет и младше получат кредит в размере 3000 долларов, а семьи с детьми до 6 лет получат кредит в размере 3600 долларов.Согласно Центру по бюджетным и политическим приоритетам, это также делает кредит полностью возмещаемым, удаляя как ограничение в долларах, так и ограничение дохода, которое в настоящее время не позволяет многим малообеспеченным семьям с детьми получить полный кредит.

Размер кредита начнет снижаться для одиноких людей, зарабатывающих более 75 000 долларов в год, и супружеских пар, зарабатывающих более 150 000 долларов в год. В случае одобрения платежи будут отправляться ежемесячно в течение года, начиная с июля.

Первоначальный план Байдена также призывал семьи получать кредит на уход за детьми. Семья с одним ребенком может получить в общей сложности до 4000 долларов, а семьи с еще двумя детьми могут получить 8000 долларов. Этот налоговый кредит будет возвращен и доступен семьям, зарабатывающим менее 125 000 долларов в год. Семья с доходом от 125 000 до 400 000 долларов получит частичный кредит, хотя конкретные размеры еще не объявлены.

Для 20% бедных семей с точки зрения доходов предлагаемое расширение СТС увеличит доход в среднем на 9.По данным Института налогообложения и экономической политики, 7% — даже выше, если рассматривать только налоговых декларантов с детьми. Это предложение также поможет вывести 4,1 миллиона детей за черту бедности, сократив число детей, живущих в бедности, более чем на 40%, сообщил Центр по бюджетным и политическим приоритетам.

Если размер детской налоговой скидки будет увеличен, вы можете получать ежемесячный чек в течение года.

Кто конкретно хочет увеличить размер детской налоговой скидки?

Политики обеих партий выразили поддержку расширению КТК.

4 февраля сенатор Массачусетса Митт Ромни обнародовал свое собственное предложение, согласно которому на каждого ребенка в возрасте до 6 лет будет выплачиваться 4200 долларов в год, а также 3000 долларов в год на каждого ребенка в возрасте от 6 до 17 лет. что его план можно совместить с планом демократов Палаты представителей.

Почему этот налоговый кредит получает такую ​​поддержку? Как правило, когда налоги возвращаются семьям, они, как правило, их тратят. Ожидается, что эти экономические расходы повысят экономическую активность.

«Получение денег в руки людей с низкими доходами — это давний, проверенный временем подход к стимулированию экономики», — сказал Марк Мазур, директор Центра налоговой политики Urban-Brookings.

Республиканцы впервые предложили CTC еще в 1997 году как часть Закона о льготах налогоплательщиков. И именно сенатор Марко Рубио, республиканец из Флориды, возглавил Закон о сокращении налогов и занятости от 2017 года, который удвоил кредит с 1000 долларов до нынешней суммы. Наличие демократов, добивающихся налоговых льгот, созданных республиканцами, делает более вероятной двухпартийную поддержку улучшения кредита для семей.

границ | Устойчивость к антибиотикам, опосредованная семейством транспортеров MacB ABC: структурная и функциональная перспектива

Введение

ABC (АТФ-связывающая кассета) присутствуют во всех трех сферах жизни и опосредуют трансмембранный транспорт разнообразного набора субстратов, включая лекарственные препараты, сахара, ионы, аминокислоты и белки (ter Beek et al. , 2014; Locher, 2016). Все переносчики ABC обладают консервативными доменами связывания нуклеотидов (NBD), которые способствуют выработке энергии посредством гидролиза АТФ, и трансмембранными доменами (TMD), которые определяют функцию переносчика. NBD, лежащие в основе всех переносчиков ABC, гомологичны, в то время как TMD структурно неоднородны и предположительно имеют дискретное эволюционное происхождение (Wang et al., 2009; ter Beek et al., 2014; Locher, 2016). Анализ доступных кристаллических структур ABC транспортеров показывает, что существует по крайней мере семь структурно различных складок ABC транспортеров, из которых MacB является наиболее недавно определенным представителем (Figure 1).Таким образом, MacB является «голотипом» надсемейства переносчиков ABC типа VII (Crow et al., 2017) и первым структурно охарактеризованным членом клады переносчиков ABC, классифицированных Сайером как суперсемейство ABC3 (Wang et al., 2009). ).

Рисунок 1 . Семь суперсемейств ABC-транспортеров. Один представитель от каждого суперсемейства показан окрашенными белковой цепью. Идентификаторы PDB указаны в скобках. Здесь семь складок ABC делятся на три «класса» в зависимости от функции.Семьи I-III являются импортерами, типы IV и V — экспортерами, а типы VI и VII — механотрансдукторами. Обратите внимание, что два семейства экспортеров ABC, обозначенные здесь как Тип IV и Тип V, также иногда называются экспортерами ABC типа I и II. Слева направо: переносчик молибдата (Hollenstein et al., 2007) (ModABC), переносчик витамина B12 (Korkhov et al., 2012) (BtuCDF), импортер фолиевой кислоты (Xu et al., 2013) (Ecf-FolT) , экспортер нескольких лекарственных препаратов (Dawson and Locher, 2006) (Sav1866), переносчик стеролов (Lee et al., 2016) (ABCG5 / G8), экстрактор липополисахаридов (Luo et al., 2017) (LptBFG) и транспортер энтеротоксинов и макролидов (Crow et al., 2017) (MacB). Складки названы в соответствии с ранее установленным соглашением (ter Beek et al., 2014). По материалам Crow et al. (2017).

ABC, играющие роль в устойчивости к антибиотикам, обычно являются экспортерами и работают с некоторыми вариациями механизма альтернативного доступа (см. Ниже) (ter Beek et al., 2014; Locher, 2016). У бактерий экспортеры ABC обладают шестью трансмембранными спиралями (TMH) и действуют как димеры.У эукариот они обычно существуют как очевидные слияния двух полупереносчиков, которые в остальном структурно подобны своим бактериальным аналогам (Locher, 2016). Ключевые примеры экспортеров ABC включают Sav1866 из Staphylococcus aureus (Dawson and Locher, 2006), Bacillus subtilis LmrA (van Veen et al., 1996) и P-гликопротеин человека (Aller et al., 2009).

Структуры транспортеров ABC в присутствии и в отсутствие АТФ обнаруживают различные конформации, что привело к предложению альтернативного механизма доступа для транспорта (ter Beek et al., 2014; Locher, 2016). АТФ-зависимые конформационные изменения в NBD заставляют TMD циклически переключаться между состояниями «открыто внутрь» и «открыто наружу», позволяя субстрату связываться с одной стороны мембраны и высвобождаться с другой. Во внутреннем открытом состоянии NBDs разделены, и субстраты могут связываться с сайтом на границе TMDs, обнаженным на цитоплазматической стороне мембраны (Johnson and Chen, 2017). Связывание ATP способствует прочной ассоциации NBDs и передается к TMD через консервативную спираль связывания (Dawson and Locher, 2006).Результирующая реорганизация TMD приводит к «открытому наружу» состоянию со сниженным сродством к субстрату, позволяя высвобождать его на дистальной стороне мембраны (Ramachandra et al., 1998; Johnson and Chen, 2018). Затем гидролиз АТФ сбрасывает переносчик в конформацию, обращенную внутрь. Стехиометрия гидролиза ATP на событие транслокации неясна, поскольку гетеродимерные транспортеры только с одним функциональным NBD являются компетентными в отношении транслокаций (Zutz et al., 2011). Транспорту может дополнительно способствовать трансмембранный протонный электрохимический градиент (Singh et al., 2016). Структуры закрытых состояний, в которых сайт связывания недоступен ни с одной стороны мембраны, лишены субстрата, но представляют собой вероятные промежуточные звенья на пути между внутренним и внешним открытыми состояниями (Choudhury et al. , 2014; Lin et al., 2015a; Bountra et al., 2017). Были предложены варианты механизма, при которых в переносе участвует только обращенное наружу состояние (Perez et al., 2015; Locher, 2016). В самом деле, было высказано предположение, что разнообразные структуры и субстраты ABC транспортеров несовместимы с одним унифицированным транспортным механизмом (Locher, 2016).

У грамположительных бактерий транспортеры ABC широко используются для изгнания ксенобиотиков (Lubelski et al., 2007). Отток антибиотиков грамотрицательными переносчиками ABC изучен хуже, хотя экспрессия Stenotrophomonas maltophila SmrA (Al-Hamad et al., 2009) или Serratia marcescens SmdAB (Matsuo et al., 2008) в сверхчувствительных E coli , обеспечивает устойчивость к нескольким лекарственным средствам, включая норфлоксацин и тетрациклин. Избыточная экспрессия E.coli MsbA придает устойчивость ко многим лекарственным средствам у E. coli и Lactococcus lactis (Reuter et al. , 2003; Woebking et al., 2005).

Большинство экспортеров ABC действуют независимо, транспортируя субстраты через цитоплазматическую мембрану, в которую они встроены. Однако у грамотрицательных бактерий специфические переносчики ABC могут составлять часть трехсторонних насосов оттока, более крупных сборок, которые охватывают всю клеточную оболочку и обеспечивают транспорт через внешнюю мембрану.

Трехсторонние отводящие насосы (TEP): бактериальные наномашины, управляющие оттоком антибиотиков

Грамотрицательные бактерии используют трехсторонние откачивающие насосы, которые охватывают как внутреннюю, так и внешнюю мембраны, для вывода и оттока вредных молекул, включая антибиотики. Они являются основным детерминантом множественной лекарственной устойчивости (Hinchliffe et al., 2013). Насосы состоят из выходного канала внешней мембраны, примером которого является E. coli TolC (Koronakis et al., 2000), периплазматического адаптивного белка и внутреннего мембранного переносчика. Периплазматические адаптеры имеют консервативную многодоменную архитектуру, состоящую из проксимальных (MP) мембранных (MP), β-цилиндрических, липоильных и шпилечных доменов, хотя в некоторых адаптерах отсутствует один из этих доменов (Greene et al., 2013; Hinchliffe et al., 2014). Транспортер внутренней мембраны, передающий энергию, относится к одному из четырех различных классов. Транспортеры Resistance-Nodulation-Cell Division (RND), например, AcrB, и транспортеры суперсемейства Major Facilitator (MFS), например EmrB, связывают экспорт с диссипацией трансмембранного электрохимического ионного градиента.Напротив, гидролиз АТФ используется двумя отдельными переносчиками ABC, HlyB и MacB, которые составляют третий и четвертый типы TEP (рис. 2). В E. coli все четыре класса TEP используют один белок оттока через внешнюю мембрану, TolC (Hinchliffe et al., 2013).

Рисунок 2 . Четыре класса трехсторонних отводных насосов. Слева направо: насос семейства Resistance-Nodulation-Cell Division (RND), AcrAB-TolC; Насос Major Facilitator Superfamily (MFS), EmrAB-TolC; Система секреции типа I (T1SS), HlyBD-TolC; Насос суперсемейства MacB, MacAB-TolC. IM и OM обозначают внутреннюю и внешнюю мембраны соответственно.

Транспортёры различных классов, приводящие в действие ТЭЦ

Структуры наиболее охарактеризованного компонента внутренней мембраны RND, AcrB, были впервые определены более 15 лет назад. AcrB функционирует как гомотример, причем каждый мономер содержит 12 TMH и обширный периплазматический домен, выступающий на 70 Å в периплазму (Murakami et al., 2002). Последующие структуры выявили асимметричные тримеры AcrB, в которых отдельные мономеры AcrB приняли различные конформационные состояния (Murakami et al., 2006; Seeger et al., 2006). Это привело к предложению транспортного механизма, в котором каждый мономер циклически переключается между открытым, свободным и прочным состояниями связывания с субстратом для осуществления транспорта. Широкая субстратная специфичность AcrB объясняется множеством сайтов связывания для лекарств и путями проникновения как из внешнего листка внутренней мембраны, так и из периплазмы (Nakashima et al. , 2011; Eicher et al., 2012; Zwama et al., 2018 ). Совсем недавно структуры собранного комплекса AcrAB-TolC были получены с использованием негативного окрашивания и криоэлектронной микроскопии (крио-ЭМ) (Du et al., 2014; Даури и др., 2016; Wang et al., 2017).

транспортеров MFS, ассоциирующих с TEP, менее изучены. В E. coli примером является EmrB, который с его родственным адаптером EmrA придает устойчивость к гидрофобным соединениям, включая разобщитель протон-движущей силы, CCCP и налидиксовую кислоту (Lomovskaya and Lewis, 1992). EmrB, как предполагается, содержит 14 TMHs и, в отличие от других транспортеров TEP, лишен существенного периплазматического домена (Tanabe et al., 2009). В соответствии с этим EmrA не имеет домена MP (Hinchliffe et al., 2014), что у др. Транспортеров образует обширные взаимодействия с периплазматическим доменом транспортера (Du et al., 2014). Сообщалось, что переносчики MFS действуют как мономеры или димеры (Quistgaard et al., 2016). Сообщалось, что очищенный EmrB образует димеры (Tanabe et al. , 2009), тогда как диаметр смоделированного гексамера EmrA совместим с мономерным EmrB (Hinchliffe et al., 2014). Дальнейшие исследования необходимы для понимания стехиометрии EmrB in vivo и взаимодействий EmrA-EmrB, лежащих в основе сборки насоса.

В E. coli два очень разных транспортера ABC образуют TolC-зависимые TEP; HlyB и MacB. HlyB действует согласованно с адаптером HlyD, чтобы экспортировать большой белковый токсин, гемолизин A (HlyA), из цитоплазмы через обе мембраны согласованным шагом (Thanabalu et al., 1998). Топологический анализ и кристаллическая структура гомолога, экспортирующего пептид (PCAT1), демонстрируют, что HlyB имеет классическую топологию 6-TMH с NBD, слитым с C-концом (Lin et al., 2015a). И наоборот, анализ последовательности E.coli MacB предположил, что у него нетипичная топология. За N-концевым цитоплазматическим NBD следуют четыре TMH с большим периплазматическим доменом примерно из 200 аминокислот, расположенным между TMh2 и TMh3. Топология 4-TMH, предсказанная на основе аминокислотной последовательности, была экспериментально подтверждена сайт-специфической химической модификацией отдельных остатков цистеина (Kobayashi et al., 2003). Последующий биоинформатический анализ показал, что архитектура MacB широко распространена во всех бактериальных геномах (Khwaja et al., 2005; Wang et al., 2009).

MacAB-TolC TEP обеспечивает устойчивость к антибиотикам и экспорт факторов вирулентности

MacB, вместе с его периплазматическим адаптерным белком MacA, был впервые идентифицирован при скрининге генов транспортеров E. coli как обеспечивающих устойчивость к макролидным препаратам в штамме, лишенном основного оттокного насоса RND AcrAB (Kobayashi et al., 2001). Дальнейшие исследования продемонстрировали, что экспрессия MacAB увеличивает устойчивость E. coli к колистину и бацитрацину (Crow et al., 2017). Кроме того, MacAB-TolC TEP поддерживает экспорт небольших белков, таких как энтеротоксин STII (Yamanaka et al. , 2008), и предполагается, что он экспортирует протопорфирин-предшественник гема (Turlin et al., 2014).

Роль MacAB-TolC TEP была исследована на других грамотрицательных видах. S. maltophila MacAB придает устойчивость к ряду макролидов, аминогликозидов и полимиксинов (Lin et al., 2014). В Neisseria gonorrhoeae мутации в промоторе macAB повышают устойчивость к макролидам у штамма, лишенного RND pump MtrCDE (Rouquette-Loughlin et al., 2005). Acinetobacter baumannii Экспрессия MacAB значительно повышена как в клинических штаммах с множественной лекарственной устойчивостью (Lin et al., 2015b), так и в устойчивых к колистину штаммах, лишенных ЛПС (Henry et al., 2012). Экспрессия Vibrio cholerae MacAB гомолога VarDEF повышает устойчивость к четырем разным макролидам в 8 раз или больше (Lin et al., 2017), и эти гены активируются в присутствии полимиксина B (Matson et al., 2017). У видов Pseudomonas гомологи MacB секретируют токсины (Balibar et al. , 2005; Dubern et al., 2008; Лим и др., 2009; Чо и Канг, 2012; Li et al., 2013) и сидерофоры, такие как пиовердин (Imperi et al., 2009; Hannauer et al., 2010). Делеция MacB влияет на вирулентность Salmonella на мышиной модели (Nishino et al., 2006), возможно, способствуя выживанию внутри макрофагов (Bogomolnaya et al., 2013). Взятые вместе, MacB, вместе с адаптером MacA и выходным каналом наружной мембраны, TolC, могут поддерживать отток различных лекарств и экспорт факторов вирулентности от нескольких видов грамотрицательных бактерий.Хотя экспрессия TolC является конститутивной, экспрессия MacAB в Salmonella и E. coli регулируется двухкомпонентной системой PhoPQ (Nishino et al., 2006). Среди других стимулов PhoPQ воспринимает и реагирует на антимикробные пептиды хозяина и пептидные антибиотики (Bader et al., 2005; Prost et al., 2007). Таким образом, продукция MacAB, вероятно, будет индуцирована в ответ на заражение этими агентами.

Структурная биология системы MacAB-TolC

Исследования лаборатории Згурской показывают, что АТФазная активность восстановленного MacB зависит от интактного MacA. Более того, опосредованная MacAB устойчивость к антибиотикам in vivo требует наличия выходного канала наружной мембраны TolC (Тихонова и др., 2007). Взятые вместе, эти данные подтверждают, что MacAB-TolC образует функциональный ТЕР. Недавно были выяснены кристаллические структуры отдельных компонентов и крио-ЭМ-структура всего насоса, что дало существенное понимание сборки и функции ТЭП с питанием от MacB (таблица 1, рисунок 3).

Таблица 1 .Структуры в банке данных белков, связанные с MacAB-TolC.

Рисунок 3 . Ключевые конструкции трехстороннего откачивающего насоса MacAB-TolC. Коды доступа к банку данных о белках приведены в скобках, а сообщаемое разрешение указано синим текстом. Полный насос MacAB-TolC представляет собой крио-ЭМ структуру с более высоким разрешением в области MacA / TolC и более низким разрешением в области MacB (Fitzpatrick et al., 2017).

Выходной канал наружной мембраны, TolC

Первым структурным компонентом решенного TEP был канал внешней мембраны TolC (Koronakis et al. , 2000; Рисунок 3). Три мономера TolC тримеризуются с образованием 12-нитевого β-цилиндра и α-спирального туннеля длиной 100 Å, идущего вниз в периплазму. Экваториальный домен, состоящий из N- и C-концов, образует пояс вокруг середины α-спирального домена. Этот α-туннель состоит из шести пар свернутых друг в друга катушек и имеет приблизительный диаметр 35 Å почти по всей длине. Внизу канала три остатка аспартата, по одному от каждого мономера, образуют сужение ~ 4Å, эффективно закрывая канал на периплазматической стороне мембраны.Эта закрытая конформация туннеля ограничена меж- и внутримономерной сетью водородных связей и солевых мостиков. Кристаллические структуры вариантов TolC, в которых эта стабилизирующая сеть была нарушена одной или несколькими точечными мутациями, предположили, как канал открывается, чтобы позволить прохождение субстрата (Bavro et al., 2008; Pei et al., 2011). Впоследствии псевдоатомные крио-ЭМ структуры насоса AcrAB-TolC в присутствии и в отсутствие субстрата выявили радужно-подобное отверстие периплазматического сужения TolC дикого типа (Wang et al. , 2017). Гомологи TolC от других организмов расходятся по последовательности и демонстрируют вариации в структуре экваториального домена (Akama et al., 2004; Federici et al., 2005; Kulathila et al., 2011; Su et al., 2014; Guan et al. др., 2015; Йонехара и др., 2016). Однако та же самая структура β-ствола и α-туннеля очевидна, что указывает на то, что грубая топология, вероятно, будет сохранена во всех каналах оттока внешней мембраны от грамотрицательных бактерий.

Периплазматический адаптерный белок, MacA

Сооружения E.coli и Aggregatibacter actinomycetemcomitans MacA были определены с помощью рентгеновской кристаллографии (Yum et al., 2009; Xu et al., 2012). Подобно адаптерам насоса RND, AcrA (Mikolosko et al., 2006) и MexA (Higgins et al., 2004), адаптер MacA включает спиральную шпильку, липоил, β-цилиндрический и MP домены. Нативный белок MacA также имеет N-концевой TMH, что отличает его от других адаптеров, включая AcrA и MexA, обычно прикрепленных к внутренней мембране N-концевой липоильной группой (Hinchliffe et al. , 2013). Однако кристаллические структуры MacA определяли с использованием белковых конструкций, лишенных этого N-концевого TMH. И E. coli , и A. actinomycetemcomitans MacA кристаллизовались в виде гексамеров без дополнительной стабилизации с использованием химических сшивающих реагентов или сконструированных дисульфидных связей (Yum et al., 2009; Xu et al., 2012). Гексамер MacA напоминает перевернутую воронку со стержнем 70 Å, образованным доменами шпильки, и более широким ртом, образованным ассоциацией липоильного и β-цилиндрического доменов.Крио-ЭМ структура E. coli MacA в контексте собранной помпы обнаружила аналогичную гексамерную организацию (Fitzpatrick et al., 2017). Примечательно, что шесть петель липоильных доменов, по одной от каждого мономера, выступают в центр канала MacA. Результирующее сокращение стабилизируется межпротомерными водородными связями между остатками глутамина на конце петли (Fitzpatrick et al., 2017). Эти остатки глутамина законсервированы в белках MacA (Yum et al. , 2009; Fitzpatrick et al., 2017), но замена аланином не повлияла на MacAB, вызвавшую устойчивость к эритромицину (Fitzpatrick et al., 2017). Вместо этого моделирование управляемой молекулярной динамики показало, что петли липоильных доменов способствуют однонаправленному движению эритромицина через канал MacA. Таким образом, конструкция гексамера MacA может действовать как вентиль для регулирования потока субстратов через собранный оттокный насос (Fitzpatrick et al., 2017).

Транспортер ABC для внутренней мембраны, MacB

Структура изолированного периплазматического домена мономерного периплазматического домена MacB была решена почти 10 лет назад, обнаружив наличие двух субдоменов (Xu et al., 2009). Однако без контекста мембраны было трудно сделать вывод о механизме транспорта. Теперь ряд структур полноразмерного MacB помог раскрыть молекулярные детали его работы. MacB из A. actinomycetemcomitans и A. baumannii были кристаллизованы в АТФ- и АДФ-связанных формах соответственно (Crow et al. , 2017; Okada et al., 2017; Рисунок 3). MacB кристаллизовался в виде димера, что соответствовало результатам аналитических исследований ультрацентрифугированием и атомно-силовой микроскопии (Lin et al., 2009). Каждый мономер MacB содержит N-концевой NBD, четыре TMH и большой периплазматический домен между TMh2 и TMh3. Спиральные удлинения TMh2 и TMh3 от каждого мономера образуют пучок из четырех спиралей, который поднимает периплазматический домен над плоскостью мембраны, создавая грибовидный вид. TMh4 и TMh5 упаковываются снаружи спирального пучка и связаны короткой экстрацитоплазматической петлей, которая была названа «плечом» (Crow et al., 2017). Цитоплазматический N-конец TM1 соединен с NBD с помощью амфипатической спирали, идущей параллельно поверхности мембраны, и «огибающей петли».Основная спираль связывания расположена на цитоплазматической стороне мембраны между TM2 и TM3 и обеспечивает средство передачи конформационных изменений от NBDs к TMD, как это предлагается для других переносчиков ABC. Вторая спираль на С-конце, малая спираль сцепления, также контактирует с NBD. Удаление второстепенной спирали сцепления оказало умеренное влияние на активность E. coli MacB (Crow et al., 2017), но большее влияние на опосредованную макролидной резистентностью A. baumannii MacB (Okada et al., 2017), что может отражать различия в используемых анализах.

Двумя субдоменами периплазматического домена MacB являются Porter, названный в честь структурного сходства с доменом AcrB, и Sabre, названный по аббревиатуре: Small, альфа / бета-богатый, экстрацитоплазматический. Домен Sabre сформирован из непрерывного участка остатков (347–465 в A. actinomycetemcomitans MacB), в то время как домен Porter образован из двух мотивов β-α-β, обнаруженных по обе стороны от домена Sabre (остатки 306–346 и 466–503).Домен Портера напрямую связан с обеими спиралями стержня мономера MacB. Та же самая складка очевидна в ADP-связанной структуре MacB A. baumannii , хотя есть поразительные различия в конформации (см. Раздел о механотрансмиссии ниже). Кристаллические структуры показывают, что архитектура MacB явно отличается от классических экспортеров ABC, таких как Sav1866 (рис. 4). Как и другие экспортеры множества лекарственных препаратов, Sav1866 характеризуется топологией 6-TMH, слитым с С-концом NBD и связующей спиралью, расположенной между TMh5 и TMH5 каждого мономера, которые взаимно «перекрещиваются» для взаимодействия с NBD.MacB, напротив, имеет четыре TMH, слитый на N-конце NBD, большой периплазматический домен и главную спираль связывания, которая взаимодействует с NBD внутримолекулярным образом.

Рисунок 4 . Топологическое сравнение MacB (транспортера ABC типа VII) с классическим экспортером Sav1866 (транспортер ABC типа IV). (A) Топологические диаграммы на основе структур MacB и Sav1866. (B) Расположение линейных доменов для MacB (вверху) и Sav1866 (внизу). CH, Coupling Helix; NBD, нуклеотид-связывающий домен.Белые прямоугольники обозначают трансмембранную нумерацию спиралей.

Трехсторонний насос MacAB-TolC в сборе

Существенная техническая задача по выделению собранной помпы MacAB-TolC и поддержанию ее в процессе очистки была достигнута путем создания слияния MacA с С-концом MacB и последующего введения специфических остатков цистеина в MacA и MacB для стабилизации их взаимодействие с дисульфидными связями (Fitzpatrick et al., 2017). Кристаллические структуры E.coli MacA (Yum et al., 2009), E. coli TolC (Koronakis et al., 2000) уже были доступны. Их стыковка и модель гомологии E. coli MacB на основе структуры A. baumannii MacB (Okada et al., 2017) в крио-ЭМ карту позволили создать структуру E. coli MacAB. -TolC сборка, которую необходимо решить (Fitzpatrick et al., 2017) (рисунок 3). Собранный трехкомпонентный насос состоит из одного димера MacB, гексамера MacA и выходного канала тримерного TolC.Полная сборка MacAB-TolC составляет приблизительно 320 Å в длину, что сопоставимо с размером насоса AcrAB-TolC (Du et al. , 2014; Daury et al., 2016).

Структура показывает, как три компонента взаимодействуют в контексте собранного насоса (Fitzpatrick et al., 2017). Концы шпилечных доменов MacA зацепляются с периплазматическими концами спиральных катушек TolC. Эти взаимодействия типа «кончик к кончику» были впервые предложены на основе экспериментов по связыванию in vitro (Xu et al., 2010) и ЭМ-анализ комплекса E. coli MacA и гибридного белка, несущего концевые области спирального цилиндра TolC (Xu et al., 2011). Ассоциация с MacA стабилизирует тример TolC в открытом состоянии, в котором аспартаты в периплазматическом сужении находятся на расстоянии почти 30 Å. Это приводит к непрерывному каналу от вершины TolC до сужения липоильной петли в MacA. Взаимодействия адаптера с периплазматическим доменом MacB опосредуются β-цилиндрическим доменом MacA и доменами MP.Кольцо β-бочкообразных доменов MacA находится поверх MacB с тремя мономерами MacA, контактирующими с каждым MacB. Кольцо MP доменов MacA устанавливает обширные контакты с периплазматическим доменом MacB, что согласуется с предыдущими биохимическими исследованиями (Modali and Zgurskaya, 2011). Два домена MacA MP контактируют с Sabre, а один взаимодействует с субдоменом Porter каждого мономера MacB. Шпильчатый и липоильный домены MacA не контактируют с MacB (Fitzpatrick et al., 2017).

Структура MacB в собранном комплексе напоминает структуру ADP-связанного A.baumannii строение. NBDs разделены, и спирали стебля MacB изгибаются друг от друга, что приводит к разделению периплазматических доменов и образованию периплазматически доступной полости между MacB и MacA (Fitzpatrick et al., 2017).

Механизм механотрансмиссии MacB

Канонические транспортеры ABC обеспечивают путь трансмембранного субстрата в форме вестибюля или полости, расположенной между двумя половинами интерфейса димера (Choudhury et al., 2014). Анализ структур MacB, описанных выше, показывает, что не существует достаточного канала для обеспечения трансмембранного пути для субстрата либо в АТФ, либо в безнуклеотидном состоянии (Crow et al., 2017). Кроме того, необходим функциональный насос MacAB-TolC для экспорта пептидного субстрата энтеротоксина STII (Yamanaka et al. , 2008; Crow et al., 2017). STII экспортируется в периплазму системой Sec и требует действия периплазматически расположенной системы Dsb, чтобы катализировать образование двух ее дисульфидных связей (Foreman et al., 1995). Взятые вместе, эти данные указывают на то, что MacB не транспортирует субстраты через внутреннюю мембрану, а вместо этого принимает субстраты в периплазму и вместе с MacA выбрасывает их через внешнюю мембрану через выходной канал TolC (Figure 5). Этот механизм функционально сродни модели «периплазматического пылесоса», предложенной для транспортных насосов RND-типа, в которых субстраты связаны в периплазме и выбрасываются через внешнюю мембрану (Aires and Nikaido, 2005). Сеть дополняется автономными переносчиками во внутренней мембране, которые удаляют субстраты из цитоплазмы (Tal and Schuldiner, 2009).

Рисунок 5 . Секреция токсина и устойчивость к антибиотикам трехсторонним оттоком MacAB-TolC. (слева) Модель секреции энтеротоксина STII: (1) Энтеротоксин STII продуцируется рибосомно в цитоплазме и транспортируется в периплазму с помощью механизма Sec. (2) N-концевой сигнал секреции ( пурпурный столбик ) расщепляется, и две дисульфидные связи включаются DsbA. (3) Экспорт энтеротоксина через внешнюю мембрану бактерий осуществляется насосом MacAB-TolC. (справа) Модель детоксикации антибиотиками: (i) антибиотики (в данном случае эритромицин) в цитоплазме направляются в периплазму с помощью насосов внутренней мембраны. (ii) Антибиотики в периплазме проходят через внешнюю бактериальную мембрану с помощью MacAB-TolC. По материалам Crow et al. (2017).

Как же тогда АТФ-индуцированные изменения цитоплазматических NBDs влияют на периплазматические домены MacB? Сравнение АТФ-связанных и свободных форм MacB выявляет дальнодействующие конформационные изменения в трансмембранных спиралях, стебле и периплазматических доменах (Crow et al., 2017; Фитцпатрик и др., 2017; Окада и др., 2017). В безнуклеотидной форме связывание АТФ индуцирует димеризацию NBD, заставляя главную спираль связывания толкать вверх TM2. Получающееся в результате «застегивание» трансмембранных спиралей в жесткий пучок из 4 спиралей объединяет периплазматические домены каждого мономера, устраняя полость между ними (Рисунок 6). Мы называем эти перемещения на большие расстояния механотрансмиссией, поскольку гидролиз АТФ не используется для транспортировки субстрата через мембрану, в которой находится белок ABC, а вместо этого используется для передачи конформационных изменений от цитоплазматических NBDs для достижения полезной работы в периплазме.Важность относительных движений спиралей стебля была подчеркнута серьезным снижением функции MacB in vivo , когда спирали были заблокированы вместе дисульфидной связью (Crow et al., 2017).

Рисунок 6 . Механотрансмиссионный механизм MacB. Связывание и гидролиз АТФ вызывают большие трансмембранные конформационные изменения в структуре MacB. Вместо того, чтобы транспортировать субстраты через внутреннюю мембрану, MacB-подобные белки координируют обратимую димеризацию своих NBDs с периплазматическими конформационными изменениями.Гомологи MacB, образующие TEP, используют периплазматические конформационные изменения для продвижения субстратов через бактериальную внешнюю мембрану через TolC-подобные выходные каналы. Предполагается, что гомологи MacB, которые не образуют TEPs, используют сходные движения во время переноса липопротеинов и трансмембранной передачи сигналов. По материалам Crow et al. (2017).

Присоединение АТФ-связанной формы MacB к крио-ЭМ структуре MacAB-TolC привело к предположению, что MacB может использовать механотрансмиссию для работы собранного насоса как молекулярного сильфона (Crow et al., 2017; Рисунок 7). Гексамер MacA вмещает периплазматический домен MacB как в открытой (без АТФ), так и в закрытой (связанный с АТФ) конформации. Первоначально насос находится в безнуклеотидном состоянии, в котором спирали стебля и периплазматические домены MacB разделены. Следовательно, подложки могут попасть в полость на границе раздела MacB и MacA. Связывание АТФ сближает NBD, а механизм механотрансмиссии приводит к тесной ассоциации спиралей стебля и периплазматических доменов MacB. Последующее уменьшение объема полости создает давление, которое заставляет субстраты двигаться вверх в канал MacA и через описанный выше затвор MacA.Как только давление выравнивается, заслонка закрывается, предотвращая обратный поток подложек. Затем гидролиз АТФ перезагружает насос, при этом спирали стержня MacB раздвигаются, позволяя субстратам связываться и продолжаться еще один цикл оттока. Предлагаемая модель требует механизма предотвращения выхода субстрата обратно через MacB. Крио-ЭМ-анализ собранного AcrAB-TolC TEP выявил сокращение ~ 10 Å вдоль длинной оси насоса в связанном с субстратом состоянии (Wang et al., 2017). Подобное сжатие MacAB-TolC TEP может гарантировать, что MacA более плотно упаковывается вокруг MacB, чтобы гарантировать, что субстраты вытесняются через MacA / TolC, а не уходят в периплазму.Очевидно, что структуры связанного с субстратом состояния ТЕР, управляемого MacB, будут неоценимы для определения точных деталей его механизма.

Рисунок 7 . Механизм молекулярных сильфонов для насоса MacAB-TolC, приводимый в действие механотрансмиссией. Предлагаемый каталитический цикл откачивающего насоса MacAB-TolC (вверху) показан в сравнении с работой сильфона камина (внизу) . Субстраты вытесняются вызванными механотрансмиссией изменениями в периплазматических доменах MacB и предотвращаются от обратного потока в периплазму с помощью клапана в MacA.Отдельные компоненты насоса окрашены: MacB (красный), MacA (фиолетовый), TolC (зеленый) и субстрат (синий). По материалам Crow et al. (2017).

Мало что известно о том, как MacB распознает подложки. Необъяснимая электронная плотность в щели между перипламическими доменами MacB в собранном насосе может представлять собой эндогенный субстрат (Fitzpatrick et al., 2017), но детали остаются неясными. Мутагенез участка, состоящего преимущественно из гидрофобных остатков на внутренней поверхности периплазматического домена, снижает MacB, придавая устойчивость к эритромицину, бацитрацину и колистину.Этот пластырь представляет собой вероятный домен связывания субстрата (Crow et al., 2017). Однако до сих пор неясно, выводятся ли антибиотики напрямую или резистентность опосредована как косвенный эффект транспорта другого субстрата. Згуркская и его коллеги продемонстрировали E. coli MacA, очищенную совместно с липополисахаридом, и предположили, что нативный субстрат может быть гликолипидом (Лу и Згурская, 2013).

Биохимические данные позволяют предположить, что MacA способен влиять на АТФазную активность MacB и может играть роль в передаче информации о присутствии или отсутствии субстрата в периплазме цитоплазматическим NBD (Тихонова и др., 2007; Модали, Згурская, 2011; Лу, Згурская, 2012). Делеция цитоплазматической области или N-концевого MacA TMH нарушает опосредованную MacA стимуляцию активности MacB ATPase in vitro и предотвращает опосредованную MacAB устойчивость к макролидам in vivo (Tikhonova et al., 2007). Структурная основа стимуляции АТФазы остается неясной, потому что MacA TMH не разрешается в структуре крио-EM MacAB-TolC (Fitzpatrick et al., 2017).

Опосредованная семейством MacB устойчивость к антибиотикам у грамположительных бактерий

Классический взгляд на адаптерные белки состоит в том, что они служат мостом между внутренними и внешними мембранными компонентами TEPs.Таким образом, биоинформатический анализ, предполагающий широкое распространение адаптерных белков у грамположительных бактерий, был несколько неожиданным (Harley et al., 2000; Zgurskaya et al., 2009). Многие из генов, кодирующих эти грамположительные адаптерные белки, обнаруживаются в оперонах с гомологами macB . Первая из этих систем, которая будет охарактеризована, YknXYZ, отвечает за защиту от эндогенного токсина, пептида, задерживающего споруляцию (SDP). Высвобождение SDP вызывает лизис соседних клеток, чтобы обеспечить питательными веществами для продуцирующих клеток завершение споруляции — процесс, который был описан как бактериальный каннибализм.Зрелый SDP представляет собой пептид из 42 аминокислот с одной дисульфидной связью (Liu et al., 2010). Структуры адапторного белка YknX (Xu et al., 2017) показывают, что он имеет ту же складку и гексамерное расположение, что и E. coli MacA (Yum et al., 2009; Fitzpatrick et al., 2017). Сходным образом компонент пермеазы YknZ явно гомологичен трансмембранному и периплазматическому домену MacB (Xu et al., 2016; Fitzpatrick et al., 2017), тогда как YknY кодирует цитоплазматический NBD. Sec-зависимость экспорта SDP предполагает, что подобно MacB, YknXYZ, вероятно, обеспечивает свой защитный эффект с внецитоплазматической стороны мембраны — возможно, удерживая SDP подальше от бислоя.Интересно, что котранскрибируемый мембранный белок, YknW, может влиять на олигомеризацию и / или конформационное состояние адаптера YknX, но его роль остается загадочной (Yamada et al., 2012).

В Enterococcus faecalis , переносчик типа MacB и родственный адаптер необходимы для защиты от эндогенно продуцируемого AS-48, 70-аминокислотного циклического пептидного антибиотика (González et al., 2000). Кластер из 10 генов, организованных в два оперона, связан с биосинтезом AS-48.Первый оперон кодирует гены, ответственные за продукцию и экспорт AS-48 через цитоплазматическую мембрану, тогда как второй оперон, AS-48EFGH, важен для устойчивости к экзогенному AS-48 (Diaz et al., 2003). Вместе AS-48G (NBD) и AS-48H (TMD) кодируют MacB-подобный переносчик ABC с экстрацитоплазматическим доменом примерно из 230 аминокислот. Предполагается, что AS-48E будет содержать четыре TMH и цитоплазматические N- и C-концы. Требуются дальнейшие исследования, чтобы установить роль AS-48E и влияет ли он на активность насоса AS48-FGH аналогично YknW в насосе, экспортирующем SDP, описанном выше.

Глобальный анализ экспрессии гена Streptococcus pneumoniae D39 показал повышенную регуляцию оперона (Sp0785-0787) в ответ на бацитрацин и человеческий дефенсин LL-37. Удаление этого оперона увеличивает восприимчивость к LL-37 и линкомицину (Majchrzykiewicz et al., 2010). Анализ этих генов показывает, что они кодируют периплазматический адаптерный белок и транспортер, гомологичный MacB. Совсем недавно были получены структуры эквивалентных белков из S. pneumoniae R6 (Spr0693-0695) (Yang et al., 2018). Эти структуры обнаруживают замечательное структурное сходство с уже кристаллизовавшимися грамотрицательными белками. S. pneumoniae MacA (далее SpMacA) кристаллизовался в отсутствие домена MP и состоит из характерных β-цилиндрических, липоильных и α-спиральных доменов шпильки. Петля липоильного домена от каждого мономера проецируется в канал SpMacA аналогично тому, как это наблюдается в структуре E. coli MacA (Fitzpatrick et al., 2017). Однако остаток на кончике не сохраняется, и физиологическая роль петли SpMacA не проверялась (Yang et al., 2018). SpMacB удивительно похож на грамотрицательные структуры MacB (Crow et al., 2017; Fitzpatrick et al., 2017; Okada et al., 2017; Yang et al., 2018). Он был кристаллизован в присутствии негидролизуемого аналога АТФ AMP-PNP, хотя это не было разрешено в структуре, и расположение спиралей стержня больше похоже на АДФ-связанную или без нуклеотидную форму (Fitzpatrick et al. , 2017; Okada et al., 2017; Yang et al., 2018). Как и в случае с E. coli MacAB (Тихонова и др., 2007), АТФазная активность SpMacB, восстановленного в протеолипосомах, стимулировалась совместной реконструкцией с полноразмерным SpMacA, но не с помощью вариантов, лишенных цитоплазматической области и N-концевого TMH (Yang et al., 2018).

В этих грамположительных системах присутствует адаптерный белок, но какова его роль при отсутствии внешней мембраны? Крио-ЭМ исследования образцов застеклованных клеток выявляют дискретную зону между внутренней мембраной и пептидогликаном, сродни грамположительной «периплазме» (Matias and Beveridge, 2006; Zuber et al., 2006). Таким образом, присутствие этих адаптеров может формировать каналы для удаления ксенобиотиков из этого пространства и предотвращать их немедленную повторную ассоциацию с мембраной. Высота канала SpMacA согласуется с размерами этой периплазмоподобной зоны (Yang et al., 2018), а очищенный адаптер YknX способен связывать пептидогликан (Xu et al., 2017). Дальнейший анализ грамположительных MacAB-подобных сборок важен для понимания их роли in vivo .

Определение угрозы лантибиотиков и противодействие ей с использованием архитектуры MacB

Лантибиотики представляют собой посттрансляционно модифицированные пептиды, содержащие полициклические тиоэфирные аминокислоты лантионин или метиллантионин e.g., бацитрацин и низин (Draper et al., 2015). Они продуцируются грамположительными бактериями с низким содержанием G + C и обычно мешают биосинтезу клеточной стенки / пептидогликана, связываясь с предшественниками, такими как ундекапренилпирофосфат (UPP) и липид II (Draper et al., 2015). Существует множество методов устойчивости к лантибиотикам, но любопытно, что один класс белков устойчивости — это переносчики ABC, гомологичные белкам MacB. Эти системы представлены BceAB B. subtilis , но были охарактеризованы множественные гомологи у других грамположительных бактерий, включая Streptococcus mutans MbrAB (Tsuda et al., 2002), Listeria monocytogenes AnrAB (Collins et al., 2010), S. aureus VraFG (Meehl et al., 2007) и Streptococcus agalactiae NsrFP (Khosa et al., 2013).

BceA кодирует домен АТФазы, а BceB — это мембранная пермеаза с десятью TMH и большим внеклеточным доменом между TMH7 и TMH8. Последние четыре TMH и промежуточный периплазматический домен топологически подобны MacB. Интересно, что транспортеры типа BceAB, по-видимому, эволюционировали вместе с двухкомпонентной системой (TCS), которая работает с BceAB, чтобы воспринимать внеклеточные антибиотики и реагировать на них (Coumes-Florens et al., 2011; Динтнер и др., 2011). Обычно TCS состоят из внутренней гистидинкиназы мембраны, которая фосфорилирует регулятор ответа для контроля экспрессии гена в ответ на внешний стимул. Двухгибридный анализ белков предполагает, что BceB и BceS напрямую взаимодействуют (Kallenberg et al., 2013; Dintner et al., 2014). Однако, в отличие от классических систем TCS, гистидинкиназа (BceS) не может напрямую воспринимать антибиотики и требует присутствия BceB и активного домена BceA-АТФазы для ответа на бацитрацин (Rietkötter et al., 2008). Было предложено два различных механизма детоксикации, опосредованной BceB. Kingston и его коллеги предположили, что BceAB индуцирует резистентность, переворачивая UPP во внутренний листок цитоплазматической мембраны, тем самым защищая его от бацитрацина (Kingston et al., 2014). Напротив, Динтнер и соавторы продемонстрировали, что очищенный комплекс BceAB может напрямую связывать бацитрацин-Zn ²⁺ , активную форму пептида, с наномолярным сродством. Поэтому они предположили, что BceAB опосредует резистентность путем прямого оттока самого бацитрацина (Dintner et al., 2014). Хотя природа субстрата in vivo остается неясной, BceAB активен как в восприятии, так и в детоксикации бацитрацина.

Анализ последовательности BceB указывает на возможное слияние двух архитектур MacB, в котором первый периплазматический домен был потерян (Dintner et al., 2014). В соответствии с этой идеей бактериальный двухгибридный анализ предполагает, что мономеры BceB не взаимодействуют. Кроме того, гель-хроматографический анализ очищенного детергентом комплекса BceA: BceB показал стехиометрию 2: 1, хотя очищенный комплекс не обладал АТФазной активностью (Dintner et al., 2014). Мутации, влияющие как на восприятие, так и на детоксикацию бацитрацина, отображаются на C-концевую половину BceB, включая TMH8 (Kallenberg et al., 2013). Эта спираль эквивалентна TMh3 в MacB, предполагая, что механизм, подобный механотрансмиссии, также может лежать в основе действия BceB.

В отличие от YknYZ и SpMacB, обсуждаемых в предыдущем разделе, BceAB не связан с адаптерным белком. Однако интересно отметить, что активность гомолога BceAB из S. aureus (VraDE) модулируется мембранным белком с двумя TMH (VraH), который имеет цитоплазматические N- и C-концы.Двухгибридный анализ продемонстрировал, что VraH взаимодействует с VraE и увеличивает устойчивость к даптомицину и галлидермину, но механизм этой модуляции не ясен (Popella et al., 2016).

Информация о более широком семействе транспортеров ABC для MacB

Гомологи MacB для формования ТЭП

Структуры и механизмы, подробно описанные здесь, вероятно, также применимы к гомологам MacB, работающим как часть трехсторонних насосов оттока для экспорта субстратов, отличных от антибиотиков (Таблица 2). Одним из таких примеров является экспорт сидерофоров пиовердина Pseudomonas aeruginosa PvdRT-OpmQ.Пиовердин созревает под действием периплазматических ферментов, и мутанты, лишенные PvdRT, накапливают пиовердин в периплазме. Эти наблюдения подтверждают, что гомолог MacB PvdT обеспечивает транспорт из периплазмы, а не из цитоплазмы (Hannauer et al., 2010). У других видов Pseudomonas гомологи MacAB необходимы для секреции фитотоксина (Cho and Kang, 2012). В этих системах опероны биосинтеза токсина включают гомологи MacAB. По аналогии с MacB, потребуется другой насос для экспорта синтезированного не рибосомами пептида через цитоплазматическую мембрану в периплазму, роль, которую могут выполнять ABC-транспортеры SyrD-типа (Quigley et al., 1993).

Таблица 2 . Представитель суперсемейства MacB TEPs.

ABC-транспортер DevCA MacB-типа, адаптерный белок DevB и гомолог TolC HgD образуют TEP, ответственный за экспорт гликолипида, лежащий в основе образования гетероцист в азотфиксирующих цианобактериях Anabaena . Удаление N-конца DevB предотвращает экспорт субстрата, но не ассоциацию с DevCA, что позволяет предположить, что цитоплазматическая область адаптерного белка может контролировать активность насоса, как это было предложено для E.coli MacAB-TolC (Staron et al., 2011, 2014).

Энтероагрегант E. coli экспрессирует кодируемую плазмидой вирулентность ТЕР на основе MacB, предназначенную для экспорта дисперсина, положительно заряженного, связанного с поверхностью белка, который предотвращает агрегацию бактерий (Nishi et al., 2003). Подобный ТЕР экспортирует гомолог диспергина, CexE, из энтеротоксигенной E. coli (Pilonieta et al., 2007). Структура дисперсина 10 кДа состоит из двух антипараллельных трехцепочечных бета-листов с украшающими α-спиралями на обоих концах, что приводит к форме «пули» диаметром 20 Å и длиной 50 Å (Velarde et al., 2007). Самый узкий размер соответствует транспортировке через периплазматическую полость MacB (и просвет выходного канала TolC), но может представлять верхний предел размера для сложенных субстратов, которые транспортируются MacB-зависимыми TEP.

ТЭП-независимые гомологи MacB

Архитектура MacB также обнаруживается в белках, которые работают независимо от адаптерных белков / TEPs (Table 3). Например, LolCDE, транспортер ABC с той же топологической организацией, что и MacB, поддерживает перенос липопротеинов у грамотрицательных бактерий.Липопротеины, предназначенные для внешней мембраны, сначала транспортируются через цитоплазматическую мембрану с помощью системы Sec, а затем последовательно ацилируются внутренними механизмами мембран (Narita and Tokuda, 2017). Затем LolCDE извлекает липидную составляющую липопротеинов из внешнего листочка внутренней мембраны и передает его периплазматическому шаперону LolA для доставки к внешней мембране. LolD кодирует NBD, в то время как LolC и LolE имеют архитектуру типа MacB спирали 4-TM (Yakushi et al., 2000; Narita and Tokuda, 2017).Структура периплазматического домена LolC обнаруживает складку, гомологичную MacB, это указывает на то, что экстракция липопротеинов может осуществляться комплексом LolCDE с использованием механизма механотрансмиссии (Crow et al., 2017).

Таблица 3 . Репрезентативные гомологи, не образующие TEP, транспортера MacB ABC.

Архитектура MacB также присутствует в FtsEX, который необходим для эффективного деления клеток у грамотрицательных бактерий (Schmidt et al., 2004; Yang et al., 2011; Du et al., 2016), споруляция у Bacillus (Garti-Levi et al., 2008) и выживаемость микобактерий (Mavrici et al., 2014) и Streptococcus (Sham et al., 2011). Предполагается, что у этих организмов комплекс FtsEX регулирует активность внецитоплазматических амидаз клеточной стенки на заключительных стадиях деления клеток. В периплазматическом домене Mycobacterium tuberculosis FtsX отсутствует значительный субдомен Sabre, но субдомен Портера очень похож на субдомен E.coli MacB (Mavrici et al., 2014; Crow et al., 2017). Отсутствие Sabre и сохранение субдомена Porter в FtsEX поднимает интересные вопросы относительно роли этих субдоменов в MacB и др. Переносчиках ABC типа VII, включая LolCDE и FtsEX. Насколько нам известно, субдомен Портера присутствует у всех членов суперсемейства ABC типа VII и, вероятно, является внутренней частью аппарата механотрансмиссии. Роль субдомена Sabre менее очевидна, но он может быть адаптирован для выполнения определенных задач в различных белках.

HrtAB — еще один переносчик ABC, гомологичный MacB, обнаруженный у грамположительных бактерий. Пара HrtAB была первоначально предложена для защиты клеток от токсического действия высоких концентраций гема путем удаления его из цитоплазмы (Stauff et al., 2008; Bibb and Schmitt, 2010). Прямой перенос субстратов из цитоплазмы во внеклеточное пространство еще не продемонстрирован, и более поздние исследования предполагают, что HrtAB удаляет гем с мембраны у S. aureus (Wakeman et al., 2012) и L. lactis (Joubert et al., 2014). В соответствии с этой идеей, мутация двух консервативных остатков тирозина в периплазматическом домене отменяет опосредованную HrtAB толерантность к гемовому стрессу. Сравнение HrtB с MacB предполагает, что эти остатки отображаются на верхушке стебля, и поэтому есть соблазн предположить, что они могут координировать гем во время транспортировки. Дальнейшее изучение HrtAB важно для оценки того, получает ли эта сборка субстраты из цитоплазмы или нет, и может ли она транспортировать такие субстраты через внутреннюю мембрану.

YbbP представляет собой белок E. coli с неизвестной функцией, который, по-видимому, представляет собой слияние двух единиц пермеазы MacB с двумя связывающими TMH. Исследование этого и других гомологов показывает, что архитектура MacB 4-TMH может быть организована по-разному. NBD могут быть слиты с TMD или кодироваться отдельным полипептидом. Точно так же трансмембранные домены могут организовываться как гомодимер (MacB и FtsX) или гетеродимер индивидуальных единиц (LolCE). Альтернативно, два домена пермеазы могут быть слиты в один полипептид с двумя пересекающимися TMH и либо одним (BceB), либо двумя периплазматическими доменами (YbbP; фиг. 8).Как ранее отмечал Milton Saier, одна перестановка, которая, по-видимому, отсутствует в этом ABC суперсемействе, представляет собой слияние двух пермеазных доменов и двух NBDs в один полипептид (Khwaja et al., 2005). В случаях, когда TMD представляют собой очевидное слияние двух мономеров, NBD всегда кодируется как отдельный белок (Khwaja et al., 2005).

Рисунок 8 . Топологическая организация членов семейства MacB. Линейное расположение доменов (слева) и трансмембранные топологии (справа) показаны для MacB и четырех репрезентативных гомологов.Сверху вниз, переносчик макролидов и токсинов MacB, белок клеточного деления FtsEX, транспорт липопротеинов LolCDE, YbbAP (неизвестная функция), обнаружение бацитрацина и белок BceAB. ABC транспортеры MacB типа разделяют отличительную трансмембранную топологию, хотя NBD не всегда сливаются с трансмембранным кодирующим доменом, и некоторые семейства существуют как очевидные слияния двух полутранспортеров. Идентичность последовательностей между периплазматическими доменами каждого мотива типа VII низкая, но внеклеточный домен Mycobacterium tuberculosis FtsEX (Mavrici et al., 2014) также содержит субдомен Портера, что позволяет предположить, что это может быть общий элемент белков ABC типа VII.

Выводы и направления на будущее

MacB и его гомологи придают устойчивость к антибиотикам, но имеющиеся данные свидетельствуют о том, что они не переносят субстраты через цитоплазматическую мембрану. Кристаллические и крио-ЭМ структуры демонстрируют, как отличительная архитектура MacB использует механизм механотрансмиссии, в котором энергия цитоплазматического гидролиза АТФ передается через трансмембранные движения для выполнения полезной работы во внецитоплазматическом пространстве.Несмотря на недавние достижения, остается много вопросов. Отсутствие связанной с субстратом структуры является одним из самых больших препятствий для нашего коллективного понимания ABC-транспортеров MacB-типа. Связанные с субстратом структуры других экспортеров ABC являются исключением, а не правилом (Johnson and Chen, 2017; Mi et al., 2017), но они продемонстрируют, как субстрат распознается периплазматическим доменом MacB. N-конец MacA влияет на АТФазную активность MacB, но этот регион не разрешен ни в одной из текущих структур; Четкая структурная информация, демонстрирующая, как эта область MacA может влиять на MacB, жизненно важна для полного понимания механизма.

Все доступные структуры были определены с использованием белков, солюбилизированных детергентом, но присутствие мембранной среды резко изменяет АТФазную активность MacB и его реакцию на MacA (Тихонова и др., 2007; Пикард и др., 2018). Масс-спектрометрический анализ очищенного MacB показал, что он специфически связывает молекулы фосфатидилэтаноламина (Barrera et al., 2009), в то время как было обнаружено, что различные фосфолипиды по-разному влияют на активность LolCDE, гомолога MacB (Miyamoto and Tokuda, 2007).Структуры MacB в контексте липидного бислоя могут помочь выявить, как специфические фосфолипиды могут модулировать активность транспортера.

Еще одним важным направлением исследований будет лучшее понимание диапазона субстратов, с которыми взаимодействуют MacB-подобные белки. Пептидные субстраты MacB и его гомологи обычно представляют собой небольшие пептиды с дисульфидной связью, напоминающие некоторые антимикробные пептиды, такие как дефенсины млекопитающих. Экспрессия MacB-подобных белков влияет на выживаемость Salmonella и Streptococcus pyogenes в макрофагах (Phelps, Neely, 2007; Bogomolnaya et al., 2013). Может ли MacB защитить патогенные бактерии в системах хозяина за счет оттока дефенсинов или других субстратов, требует дальнейшего изучения. Более того, явное структурное разнообразие и размерный диапазон репертуара субстратов MacB (от ~ 0,5 кДа макролидов до 10 кДа белков, таких как дисперсин) требует объяснения.

В Bacillus , дополнительный мембранный белок, который не обнаруживается в обычных трехкомпонентных системах грамотрицательных бактерий, YknW, ассоциируется с грамположительным гомологом MacAB YknXYZ и влияет на его активность.Более того, небольшой мембранный белок, AcrZ, модулирует действие E. coli AcrAB-TolC TEP (Hobbs et al., 2012). Многие небольшие мембранные белки в E. coli остаются не охарактеризованными (Storz et al., 2014), и поэтому нельзя исключать возможность влияния других белков на активность MacB.

MacB-опосредованная устойчивость к антибиотикам и участие его гомологов в различных аспектах бактериальной физиологии делают переносчики ABC типа VII привлекательной мишенью для антибиотикотерапии.Ингибиторы MacAB не были выделены, но скрининг химических библиотек выявил два разных ингибитора, нацеленных на гомолог MacB LolCDE (McLeod et al., 2015; Nayar et al., 2015; Nickerson et al., 2018). Мутации, придающие карту устойчивости стеблевым спиралям, и, что интересно, один из этих ингибиторов стимулировал АТФазную активность LolCDE in vitro (Nickerson et al., 2018). Следовательно, эти ингибиторы могут функционировать, разъединяя гидролиз АТФ с механотрансмиссивным движением внецитоплазматических доменов.Ясно, что общий класс ингибиторов, которые могут прерывать механотрансмиссию, будет незамедлительно полезен в качестве инструментов для изучения MacB-подобных транспортеров и, в более долгосрочной перспективе, в качестве потенциальных новых антибиотиков. В самом деле, нацеливание на MacB-подобные транспортеры ABC для ингибирования особенно привлекательно не только потому, что FtsEX и LolCDE важны, но также потому, что этот класс транспортеров отсутствует у людей.

Значение архитектуры MacB в физиологии бактерий становится все более очевидным.Современные структуры теперь служат шаблоном для понимания его действия не только в отношении устойчивости к антибиотикам, но и в основе множества фундаментальных процессов в бактериальных клетках, которые сами являются мишенями для противомикробной терапии.

Авторские взносы

Н.Г. написала черновик рукописи. Цифры подготовили AC и EK. Все авторы прочитали и отредактировали окончательную рукопись.

Финансирование

Авторы с благодарностью принимают гранты от Совета по медицинским исследованиям (MR / N000994 / 1) и Wellcome Trust (101828 / Z / 13 / Z).

Заявление о конфликте интересов

Авторы заявляют, что исследование проводилось в отсутствие каких-либо коммерческих или финансовых отношений, которые могут быть истолкованы как потенциальный конфликт интересов.

Рецензент AN заявил о своей совместной принадлежности, без сотрудничества, с несколькими авторами, NG, EK, VK, к редактору, занимающемуся обработкой.

Список литературы

Айрес, Дж. Р., и Никайдо, Х. (2005). Аминогликозиды захватываются как из периплазмы, так и из цитоплазмы с помощью переносчика оттока нескольких лекарственных препаратов AcrD Escherichia coli . J. Bacteriol. 187, 1923–1929. DOI: 10.1128 / JB.187.6.1923-1929.2005

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Акама, Х., Канемаки, М., Йошимура, М., Цукихара, Т., Кашиваги, Т., Йонеяма, Х. и др. (2004). Кристаллическая структура белка наружной мембраны, выделяющего лекарство, OprM, из Pseudomonas aeruginosa : двойные режимы фиксации мембраны и закрытого конца полости. J. Biol. Chem. 279, 52816–52819. DOI: 10.1074 / jbc.C400445200

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Аль-Хамад, А., Аптон, М., и Берни, Дж. (2009). Молекулярное клонирование и характеристика SmrA, нового насоса для оттока нескольких лекарственных препаратов ABC из Stenotrophomonas maltophilia . J. Antimicrob. Chemother. 64, 731–734. DOI: 10.1093 / jac / dkp271

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Аллер, С. Г., Ю, Дж., Уорд, А., Вэн, Ю., Читтабойна, С., Чжуо, Р. и др. (2009). Структура P-гликопротеина выявляет молекулярную основу для полиспецифического связывания лекарств. Наука 323, 1718–1722.DOI: 10.1126 / science.1168750

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бадер, М. В., Сановар, С., Дейли, М. Е., Шнайдер, А. Р., Чо, Ю., Сюй, В., и др. (2005). Распознавание антимикробных пептидов бактериальной сенсорной киназой. Cell 122, 461–472. DOI: 10.1016 / j.cell.2005.05.030

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Балибар, К. Дж., Вайланкур, Ф. Х. и Уолш, К. Т. (2005). Образование аминокислотных остатков D при сборке артрофактина за счет двойных доменов конденсации / эпимеризации. Chem. Биол. 12, 1189–1200. DOI: 10.1016 / j.chembiol.2005.08.010

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Баррера, Н. П., Исааксон, С. К., Чжоу, М., Бавро, В. Н., Уэлч, А., Шедлер, Т. А., и др. (2009). Масс-спектрометрия мембранных переносчиков выявляет стехиометрию субъединиц и взаимодействия. Nat. Методы 6, 585–587. DOI: 10.1038 / nmeth.1347

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бавро, В.N., Pietras, Z., Furnham, N., Pérez-Cano, L., Fernández-Recio, J., Pei, X.Y., et al. (2008). Сборка и открытие канала в машине для удаления бактериальных лекарств. Mol. Cell 30, 114–121. DOI: 10.1016 / j.molcel.2008.02.015

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бибб, Л. А., и Шмитт, М. П. (2010). Транспортер ABC HrtAB придает устойчивость к токсичности для гемина и регулируется гемин-зависимым образом двухкомпонентной системой ChrAS в Corynebacterium diphtheriae . J. Bacteriol. 192, 4606–4617. DOI: 10.1128 / JB.00525-10

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Богомольная Л. М., Эндрюс К. Д., Таламантес М., Мейпл А., Рагоза Ю., Васкес-Торрес А. и др. (2013). Оттокный насос MacAB типа ABC защищает серовар typhimurium Salmonella enterica от окислительного стресса. MBio 4, e00630 – e00613. DOI: 10.1128 / mBio.00630-13

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бунтра, К., Hagelueken, G., Choudhury, H.G., Corradi, V., El Omari, K., Wagner, A., et al. (2017). Структурная основа самоиммунитета к антибактериальным пептидам посредством бактериального переносчика ABC McjD. EMBO J. 36, 3062–3079. DOI: 10.15252 / embj.201797278

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Чоудхури, Х. Г., Тонг, З., Матаван, И., Ли, Ю., Ивата, С., Зира, С. и др. (2014). Структура антибактериального пептидного переносчика АТФ-кассеты в новом закрытом состоянии наружу. Proc. Natl. Акад. Sci. США 111, 9145–9150. DOI: 10.1073 / pnas.1320506111

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Коллинз Б., Кертис Н., Коттер П. Д., Хилл К. и Росс Р. П. (2010). ABC-транспортер AnrAB способствует врожденной устойчивости Listeria monocytogenes к низину, бацитрацину и различным бета-лактамным антибиотикам. Антимикробный. Агенты Chemother. 54, 4416–4423. DOI: 10.1128 / AAC.00503-10

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Coumes-Florens, S., Брошье-Армане, К., Гузеппи, А., Денизот, Ф., и Фоглино, М. (2011). Новый высококонсервативный путь чувствительности к антибиотикам / резистентности у фирмикутов включает в себя ABC-транспортер, взаимодействующий с системой передачи сигнала. PLoS ONE 6: e15951. DOI: 10.1371 / journal.pone.0015951

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кроу А., Грин Н. П., Каплан Э. и Коронакис В. (2017). Строение и механизм механотрансмиссии суперсемейства MacB ABC транспортеров. Proc. Natl. Акад. Sci. США 114, 12572–12577. DOI: 10.1073 / pnas.1712153114

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Даури, Л., Оранж, Ф., Таво, Ж.-К., Вершер, А., Монлезун, Л., Гуну, К. и др. (2016). Трехсторонняя сборка многолекарственных насосов РНД. Nat. Commun. 7: 10731. DOI: 10.1038 / ncomms10731

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Диас, М., Вальдивия, Э., Мартинес-Буэно, М., Фернандес, М., Солер-Гонсалес, А.С., Рамирес-Родриго, Х. и др. (2003). Характеристика нового оперона as-48EFGH из кластера генов as-48, участвующих в иммунитете к энтероцину AS-48. Заявл. Environ. Microbiol. 69, 1229–1236. DOI: 10.1128 / AEM.69.2.1229-1236.2003

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Динтнер, С., Хеерманн, Р., Фанг, К., Юнг, К., и Гебхард, С. (2014). Сенсорный комплекс, состоящий из АТФ-связывающего кассетного транспортера и двухкомпонентной регуляторной системы, контролирует устойчивость к бацитрацину у Bacillus subtilis . J. Biol. Chem. 289, 27899–27910. DOI: 10.1074 / jbc.M114.596221

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Динтнер, С., Старон, А., Берхтольд, Э., Петри, Т., Машер, Т., и Гебхард, С. (2011). Коэволюция переносчиков ABC и двухкомпонентных регуляторных систем как модулей устойчивости к антимикробным пептидам у бактерий Firmicutes. J. Bacteriol. 193, 3851–3862. DOI: 10.1128 / JB.05175-11

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Дуберн, Дж.-Ф., Коппулс, Э. Р., Стикема, В. Дж., И Блумберг, Г. В. (2008). Генетическая и функциональная характеристика кластера генов, управляющих биосинтезом путизолвина I и II в штамме Pseudomonas putida PCL1445. Микробиология 154, 2070–2083. DOI: 10.1099 / mic.0.2008 / 016444-0

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Du, D., Wang, Z., James, N.R., Voss, J.E., Klimont, E., Ohene-Agyei, T., et al. (2014). Конструкция откачивающего насоса для нескольких лекарственных препаратов AcrAB-TolC. Природа 509, 512–515. DOI: 10.1038 / природа13205

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Du, S., Pichoff, S., и Lutkenhaus, J. (2016). FtsEX действует в соответствии с FtsA для регулирования сборки и активности дивизомов. Proc. Natl. Акад. Sci. США 113, E5052 – E5061. DOI: 10.1073 / pnas.1606656113

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Eicher, T., Cha, H., Seeger, M. A., Brandstätter, L., El-Delik, J., Bohnert, J.A., et al. (2012). Транспортировка лекарств с помощью переносчика множества лекарственных средств AcrB включает доступ и глубокий связывающий карман, которые разделены переключающей петлей. Proc. Natl. Акад. Sci. США 109, 5687–5692. DOI: 10.1073 / pnas.1114944109

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Federici, L., Du, D., Walas, F., Matsumura, H., Fernandez-Recio, J., McKeegan, K. S., et al. (2005). Кристаллическая структура белка внешней мембраны VceC бактериального патогена Vibrio cholerae at 1.8 Разрешение. J. Biol. Chem. 280, 15307–15314. DOI: 10.1074 / jbc.M500401200

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Фитцпатрик, А. В. П., Ллабрес, С., Нойбергер, А., Блаза, Дж. Н., Бай, X.-C., Окада, У. и др. (2017). Конструкция трехкомпонентного многокомпонентного откачивающего насоса MacAB – TolC ABC. Nat. Microbiol. 2: 17070. DOI: 10.1038 / nmicrobiol.2017.70

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Бригадир Д.Т., Мартинес, Ю., Кумбс, Г., Торрес, А., и Куперсточ, Ю. М. (1995). ToIC и DsbA необходимы для секреции STB, термостабильного энтеротоксина Escherichia coli . Mol. Microbiol. 18, 237–245. DOI: 10.1111 / j.1365-2958.1995.mmi_18020237.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гарти-Леви, С., Хазан, Р., Каин, Дж., Фуджита, М., и Бен-Иегуда, С. (2008). Транспортер FtsEX ABC управляет клеточной дифференцировкой Bacillus subtilis . Mol. Microbiol. 69, 1018–1028. DOI: 10.1111 / j.1365-2958.2008.06340.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гонсалес, К., Лэнгдон, Г. М., Бруикс, М., Гальвес, А., Вальдивия, Э., Македа, М., и др. (2000). Бактериоцин AS-48, микробный циклический полипептид, структурно и функционально родственный NK-лизину млекопитающих. Proc. Natl. Акад. Sci. США 97, 11221–11226. DOI: 10.1073 / pnas.210301097

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Грин, Н.П., Хинчлифф, П., Кроу, А., Абабу, А., Хьюз, К., и Коронакис, В. (2013). Структура атипичного периплазматического адаптера от мультилекарственного оттока спирохеты Borrelia burgdorferi . FEBS Lett. 587, 2984–2988. DOI: 10.1016 / j.febslet.2013.06.056

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Гуань, Х.-Х., Йошимура, М., Чуанхаян, П., Лин, Ч.-К., Чен, Н.-К., Ян, М.-К., и др. (2015). Кристаллическая структура антигенного белка внешней мембраны из Salmonella Typhi предполагает потенциальную антигенную петлю и механизм оттока. Sci. Отчет 5: 16441. DOI: 10.1038 / srep16441

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ханнауэр, М., Шефер, М., Хёги, Ф., Гицци, П., Верунг, П., Мислин, Г. Л. А. и др. (2012). Биосинтез сидерофоров пиовердина Pseudomonas aeruginosa включает предшественники с цепочкой миристиновой или миристолеиновой кислоты. FEBS Lett. 586, 96–101. DOI: 10.1016 / j.febslet.2011.12.004

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ханнауэр, М., Йетериан, Э., Мартин, Л. В., Ламонт, И. Л., и Шалк, И. Дж. (2010). Оттокный насос участвует в секреции вновь синтезированного сидерофором Pseudomonas aeruginosa . FEBS Lett. 584, 4751–4755. DOI: 10.1016 / j.febslet.2010.10.051

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Харли К. Т., Джорджевич Г. М., Ценг Т.-Т. и Сайер М. Х. (2000). Гомологи мембранно-гибридных белков у грамположительных бактерий. Mol. Microbiol. 36, 516–517. DOI: 10.1046 / j.1365-2958.2000.01866.x

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Генри Р., Витхэджей Н., Харрисон П., Земанн Т., Куттс С., Моффатт Дж. Х. и др. (2012). Устойчивый к колистину, дефицитный по липополисахаридам Acinetobacter baumannii отвечает на потерю липополисахаридов повышением экспрессии генов, участвующих в синтезе и транспорте липопротеинов, фосфолипидов и поли-β-1,6-N-ацетилглюкоз. Антимикробный. Агенты Chemother. 56, 59–69. DOI: 10.1128 / AAC.05191-11

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хиггинс, М. К., Бокма, Э., Коронакис, Э., Хьюз, К., и Коронакис, В. (2004). Структура периплазматического компонента бактериального насоса для оттока лекарств. Proc. Natl. Акад. Sci. США 101, 9994–9999. DOI: 10.1073 / pnas.0400375101

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хинчлифф, П., Грин, Н. П., Патерсон, Н. Г., Кроу, А., Хьюз, К., и Коронакис, В. (2014). Структура периплазматического адапторного белка из главного фасилитатора суперсемейства (MFS) отток нескольких лекарственных препаратов. FEBS Lett. 588, 3147–3153. DOI: 10.1016 / j.febslet.2014.06.055

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хинчлифф, П., Симмонс, М. Ф., Хьюз, К., и Коронакис, В. (2013). Устройство и работа бактериальных трехсторонних насосов. Annu. Rev. Microbiol. 67, 221–242. DOI: 10.1146 / annurev-micro-0
-155718

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хоббс, Э. С., Инь, X, Пол, Б. Дж., Астарита, Дж. Л., и Сторц, Г. (2012). Консервативный небольшой белок связывается с оттоком нескольких лекарственных препаратов AcrB и по-разному влияет на устойчивость к антибиотикам. Proc. Natl. Акад. Sci. США 109, 16696–16701. DOI: 10.1073 / pnas.1210093109

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Импери, Ф., Тибурзи, Ф., и Виска, П. (2009). Молекулярные основы рециклинга сидерофоров пиовердина Pseudomonas aeruginosa . Proc. Natl. Акад. Sci. США 106, 20440–20445. DOI: 10.1073 / pnas.0

0106

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Джонсон, З. Л., и Чен, Дж. (2017). Структурные основы распознавания субстрата белком множественной лекарственной устойчивости MRP1. Ячейка 168, 1075.e9–1085.e9. DOI: 10.1016 / j.cell.2017.01.041

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Жубер Л., Дерре-Бобилло, А., Гауду, П., Грусс, А., и Лешардер, Д. (2014). HrtBA и менахиноны контролируют гомеостаз гема Lactococcus lactis . Mol. Microbiol. 93, 823–833. DOI: 10.1111 / mmi.12705

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Калленберг, Ф., Динтнер, С., Шмитц, Р., и Гебхард, С. (2013). Идентификация областей, важных для устойчивости и передачи сигналов в транспортере антимикробных пептидов BceAB Bacillus subtilis . J. Bacteriol. 195, 3287–3297. DOI: 10.1128 / JB.00419-13

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Ходжа, М., Ма, К., и Сайер, М. Х. (2005). Топологический анализ интегральных мембранных составляющих прокариотических систем оттока АВС. Res. Microbiol. 156, 270–277. DOI: 10.1016 / j.resmic.2004.07.010

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кингстон, А. В., Чжао, Х., Кук, Г. М., и Хельманн, Дж.Д. (2014). Накопление гептапренилдифосфата сенсибилизирует Bacillus subtilis к бацитрацину: последствия для механизма устойчивости, опосредованной транспортером BceAB. Mol. Microbiol. 93, 37–49. DOI: 10.1111 / mmi.12637

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Хоса, С., АлХатиб, З., и Смитс, С. Х. Дж. (2013). NSR из Streptococcus agalactiae придает устойчивость к низину и кодируется консервативным опероном nsr. Biol.Chem. 394, 1543–1549. DOI: 10.1515 / hsz-2013-0167

PubMed Аннотация | CrossRef Полный текст | Google Scholar

Кобаяси, Н., Нишино, К., Хирата, Т., и Ямагути, А. (2003). Топология мембран экспортера макролидных антибиотиков типа ABC MacB в Escherichia coli . FEBS Lett. 546, 241–246. DOI: 10.1016 / S0014-5793 (03) 00579-9